用自制藥敏試紙進(jìn)行肉雞大腸桿菌病的藥敏試驗(yàn)
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一 試驗(yàn)材料和方法 1 藥敏試紙的制備 藥敏紙片的制備：取杭州富陽(yáng)特種紙廠生產(chǎn)的直徑18cm的定量濾紙，用打孔器打成直徑為6mm的圓形紙片，取100片圓形紙片放入清潔干燥的
青霉素空瓶中，瓶口以單層
牛皮紙包扎，120℃干燥滅菌2小時(shí)備用�！ ∷幰旱闹苽洌喊传F藥說明書上標(biāo)明的治療量比例配制藥液。如規(guī)格為100g的抗菌物，包裝說明兌水200千克，即用天平稱藥物1g加50mL的滅菌注射水置于滅菌器皿內(nèi)，充分溶解后吸出1mL置于另一個(gè)滅菌容器中，再加入39mL的滅菌注射水。 藥敏紙片的制作：將含有100片紙片的青霉素瓶?jī)?nèi)加入配置好的藥液0.5mL，并翻動(dòng)紙片，使各紙片充分浸透藥液，同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內(nèi)過夜，干燥后即密封，切勿受潮，置陰暗干燥處存放備用�！ �2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定 細(xì)菌的分離培養(yǎng)：采用常規(guī)法將細(xì)菌病料接種于麥康凱培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。挑取單個(gè)菌落于普通瓊脂平板上進(jìn)行純培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，鏡下可見大量散在的紅色、中等大小、兩端鈍圓的無芽孢直桿菌，初步確定為大腸桿菌�！ ∩囼�(yàn)：取待檢菌培養(yǎng)物分別接種在蛋白胨水、緩沖蛋白胨水、枸櫞酸鹽、
葡萄糖、乳糖、
麥芽糖、
甘露醇、蔗糖、
尿素瓊脂、三糖鐵瓊脂、半固體瓊脂培養(yǎng)基上，置37℃恒溫箱中，培養(yǎng)24小時(shí)。結(jié)果顯示：能發(fā)酵
葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，產(chǎn)酸。尿素酶試驗(yàn)陰性，不產(chǎn)生H2S，有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。符合大腸桿菌的生化特性，證實(shí)確為大腸桿菌�！ �3 藥敏試驗(yàn)將麥康凱培養(yǎng)基上認(rèn)定的大腸桿菌菌落，無菌環(huán)境下用接種環(huán)挑出，均勻涂布在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，同時(shí)等距離放置以下藥敏紙片：
諾氟沙星、
環(huán)丙沙星、
頭孢噻肟、
氨芐西林、多
粘菌素、
頭孢曲松、氟苯尼考，置恒溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)，按以下標(biāo)準(zhǔn)判定藥物敏感度。
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