| 公開(公告)號(hào) | CN100347307C |
| 公開(公告)日 | 2007.11.07 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510042989.3 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.07.25 |
| 專利名稱 | 重組嵌合分子Cb1-Grb2(SH2)-RING真核表達(dá)質(zhì)粒及抗腫瘤基因藥物用途 |
| 主分類號(hào) | C12N15/79(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/79(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 李 霞;張 璟;劉新平;藥立波 |
| 地址 | 710032陜西省西安市長(zhǎng)樂(lè)西路17號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國(guó)省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 重組嵌合分子Cbl-Grb2(SH2)-RING真核表達(dá)載體的構(gòu)建方法，其特征在于： 首先將BamHI引入CblN基因的SH2N端，獲得CblN(BamHI)；以CblN(BamHI)為模板，同法將EcoRV引入CblN基因的SH2C端獲得CblN(BamHI+EcoRV)； 將CblN(BamHI+EcoRV)克隆入pGEM-Teasy載體進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序正確后利用KpnI/XhoI酶切并將其插入到pcDNA3.1(+)真核表達(dá)載體的KpnI/XhoI酶切位點(diǎn)之間，即得到pcDNA3.1(+)-CblN(BamHI+EcoRV)； 再以SK-BR-3細(xì)胞的cDNA為模板，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增得到Grb2SH2基因片段并克隆到pGEM-Teasy載體中，酶切鑒定及測(cè)序證實(shí)序列正確后，以BamHI和EcoRv雙酶切將Grb2SH2基因片段切出，并將經(jīng)同樣酶切的pcDNA3.1(+)-CblN(BamHI+EcoRv)載體片斷分別回收，兩片段經(jīng)T4連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5α，挑取單克隆培養(yǎng)過(guò)夜，提取質(zhì)粒，經(jīng)BamHI和EcoRv雙酶切鑒定后，對(duì)獲得預(yù)期大小的插入片段的載體再進(jìn)行測(cè)序證實(shí)，命名為pcDNA3.1(+)-Cbl-Grb2(SH2)-RING，即為重組嵌合分子Cbl-Grb2(SH2)-RING的真核表達(dá)質(zhì)粒。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了重組嵌合Cb1泛素連接酶Cb1-Grb2(SH2)-RING真核表達(dá)載體的構(gòu)建方法，所構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-Cb1-Grb7(SH2)-RING能夠作為抗HER2陽(yáng)性腫瘤的基因藥物。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明：重組嵌合分子Cb1-Grb2(SH2)-RING真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞系SK-BR-3后，通過(guò)與HER2蛋白結(jié)合并促進(jìn)其泛素化、下調(diào)，能夠有效抑制與HER2過(guò)度活化有關(guān)的細(xì)胞的增殖，因而具有抗HER2陽(yáng)性腫瘤的用途。 |
| 國(guó)際公布 |
