| 公開(公告)號 | CN1181207C |
| 公開(公告)日 | 2004.12.22 |
| 申請(專利)號 | CN01124108.X |
| 申請日期 | 2001.08.13 |
| 專利名稱 | 細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)新疆雪蓮總黃酮的方法 |
| 主分類號 | C12P17/06 |
| 分類號 | C12P17/06;C12N5/04;A01H4/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 沈陽聯(lián)美植物細(xì)胞工程有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 賈景明;張劍俠;吳立軍 |
| 地址 | 110179 遼寧省沈陽市渾南高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)21世紀(jì)大廈1709房間 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 北京太兆天元知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 張韜 |
| 國省代碼 | 遼寧;21 |
| 主權(quán)項 | 一種新疆雪蓮總黃酮的制備方法，其特征在于該方法為：以新疆雪蓮高產(chǎn)細(xì)胞株作為種子，種子的保藏號是CGMCC 0610，采用氣升式細(xì)胞反應(yīng)器作種子罐，培養(yǎng)10-15天，培養(yǎng)條件為：溫度22-26℃，光照時間為8小時/天，光照強度800-2000LX；以氣升式細(xì)胞反應(yīng)器作為生產(chǎn)罐；培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度24±1℃，光照8h/d，光照強度1000LX，培養(yǎng)時間10-15天；其培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基，并添加萘乙酸0-3.5mg/L，6-芐基嘌呤0-3.0mg/L，蔗糖1.5-2.5％，并調(diào)PH值4.5-7.5；細(xì)胞培養(yǎng)液下罐后，將雪蓮培養(yǎng)品60℃減壓干燥至恒重，研磨成粉，取粉末1.0重量份，置100體積份容器，加100體積甲醇，即其中稱取的雪蓮培養(yǎng)品與所用甲醇的配比是1.0克雪蓮粉：100毫升甲醇，放置24小時，超聲萃取40分鐘，濾過，回收甲醇，殘渣加適量水3～5體積份使溶解，難溶部分超聲溶解，放冷；通過60～85目、10g、內(nèi)徑1cm、長度15cm的聚酰胺層析柱，濕法裝柱；以水50體積份洗脫，棄去水液，再用50％乙醇100體積份洗脫，收集洗脫液，并定容至100體積份，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，棄去初濾液，取續(xù)濾液，上色譜柱，以40∶60∶1.0的甲醇∶水∶冰醋酸為流動相；檢測波長257nm，流量1.0ml/min，靈敏度0.02AUFS，柱溫室溫，進樣量10μl，進行分離，收集獲得總黃酮晶體。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供了一種采用氣升式生物反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)新疆雪蓮，從培養(yǎng)液中分離提取新疆雪蓮總黃酮的方法。該方法是在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)發(fā)酵的種子，再將種子轉(zhuǎn)移到20L生物反應(yīng)器中進行大規(guī)模培養(yǎng)。然后對反應(yīng)器中的培養(yǎng)液進行分離、純化獲取新疆雪蓮總黃酮7.1％，純度99％本發(fā)明方法生產(chǎn)成本低，不污染環(huán)境，達(dá)到了產(chǎn)業(yè)化水平。 |
| 國際公布 |
