| 公開(公告)號 | CN1188524C |
| 公開(公告)日 | 2005.02.09 |
| 申請(專利)號 | CN01107600.3 |
| 申請日期 | 2001.02.28 |
| 專利名稱 | 人SP－A1在pichia pastoris中的表達(dá) |
| 主分類號 | C12N15/81 |
| 分類號 | C12N15/81;C12N15/12;//(C12N15/81,C12R1:84) |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 珠江醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 封志純;蘭和魁 |
| 地址 | 510282 廣東省廣州市工業(yè)大道中253號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州知友專利代理有限公司 |
| 代理人 | 劉小敏 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 人SP-A1在pichiapastoris中的表達(dá)方法，其特征是：將人SP-A1基因克隆至表達(dá)載體中，通過電擊轉(zhuǎn)化技術(shù)轉(zhuǎn)入P.pastoris，并從轉(zhuǎn)化菌株中篩選出多拷貝轉(zhuǎn)化子，用高表達(dá)的甲醇氧化酶1基因(AOX1)啟動(dòng)子、利用甲醇作為唯一碳源誘導(dǎo)對重組P.pastoris進(jìn)行表達(dá)；其中，在所述的人SP-A1基因表達(dá)載體的構(gòu)建中，所設(shè)計(jì)的擴(kuò)增引物為：(+)5’-GATACGTAATGTGGCTGTGCCCTCTG-3’(-)5’-GCGGAATTCGAACTCACAGATGGTCAG-3’；所述的電擊轉(zhuǎn)化參數(shù)為1500V、25μF、400Ω；所述的甲醇濃度為0.1～0％(g/ml)。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了人SP-A1在Pichia pastoris中的表達(dá)，該方法將人SP-A1基因克隆至表達(dá)載體中，通過電擊轉(zhuǎn)化技術(shù)轉(zhuǎn)入Pichia.pastoris，并從轉(zhuǎn)化菌株中篩選出多拷貝轉(zhuǎn)化子，用高表達(dá)的甲醇氧化酶1基因(AOX1)啟動(dòng)子、利用甲醇作為唯一碳源誘導(dǎo)對重組P.pastoris進(jìn)行表達(dá)；在所述的誘導(dǎo)表達(dá)中，甲醇濃度為0.1～1.0％(g/ml)。本發(fā)明能生產(chǎn)大量、高活性的人SP-A1，其最大表達(dá)量可達(dá)150mg/L，而且所表達(dá)的目的蛋白質(zhì)能對巨噬細(xì)胞殺傷病原體發(fā)揮調(diào)理作用。 |
| 國際公布 |
