| 公開(公告)號 | CN1195062C |
| 公開(公告)日 | 2005.03.30 |
| 申請(專利)號 | CN03100415.6 |
| 申請日期 | 2003.01.13 |
| 專利名稱 | 非抗生素抗性穿梭質(zhì)粒表達(dá)載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用 |
| 主分類號 | C12N15/64 |
| 分類號 | C12N15/64;C12N15/65;C12N15/74;C12N15/70;C12N1/21;A23C9/123;A61K35/74;A23K1/16;A61P1/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 王春鳳;孫哲 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王春鳳;秦澤榮;孫哲;劉尚高 |
| 地址 | 130118 吉林省長春市南關(guān)區(qū)南環(huán)路東吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 長春科宇專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 李恩慶 |
| 國省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項 | 一種非抗生素抗性穿梭質(zhì)粒表達(dá)載體，其特征是：首先，對原始質(zhì)粒表達(dá)載體pMG26e用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切；其次，針對原始質(zhì)粒表達(dá)載體pMG26e多克隆酶切位點(diǎn)情況，設(shè)計特定連接末端擴(kuò)增非抗生素抗性選擇基因NASG；再次，將擴(kuò)增得到的非抗生素抗性選擇基因NASG連接到特定位置；最后，用限制性內(nèi)切酶徹底去除原始質(zhì)粒載體pMG26e中的抗生素紅霉素基因并環(huán)化得到質(zhì)粒載體pMG425t；pMG425t不含有抗生素抗性基因，在革藍(lán)氏陽性細(xì)菌和革藍(lán)氏陰行細(xì)菌之間穿梭表達(dá)成為質(zhì)粒表達(dá)載體。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，是一種非抗生素抗性穿梭質(zhì)粒表達(dá)載體及構(gòu)建方法和應(yīng)用。本發(fā)明是把基本質(zhì)粒載體pMG36e，經(jīng)限制性內(nèi)切酶EcoR I在其酶切位點(diǎn)上酶切，成為線型。在近紅霉素Er端連接非抗生素抗性基因，之后環(huán)化回環(huán)狀。再在這個環(huán)上把紅霉素基因Er用內(nèi)切酶去除，形成非抗生素抗性穿梭表達(dá)質(zhì)粒載體。將人或動物疾病的保護(hù)性抗原基因連接入本發(fā)明的非抗生素抗性質(zhì)粒載體，可以制造功能性食品，對特定疾病具有預(yù)防、保護(hù)作用的細(xì)菌懸液、口服補(bǔ)劑、管飼產(chǎn)品以及動物性疫苗。本發(fā)明用非抗生素可行基因替代紅霉素基因，在使用過程中不存在抗生素抗性基因擴(kuò)散的問題，避免通過質(zhì)粒載體的轉(zhuǎn)移而引起的抗生素抗性基因擴(kuò)散問題。 |
| 國際公布 |
