| 公開(公告)號 | CN1680582A |
| 公開(公告)日 | 2005.10.12 |
| 申請(專利)號 | CN200510013096.6 |
| 申請日期 | 2005.01.14 |
| 專利名稱 | 微生物轉化法制備雌酚酮的方法 |
| 主分類號 | C12P33/00 |
| 分類號 | C12P33/00;C12N1/20;//(C12P33/00,C12R1∶06) |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 天津科技大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 杜連祥;路福平;王敏;別松濤 |
| 地址 | 300222天津市河西區(qū)大沽南路1038號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 天津市學苑有限責任專利代理事務所 |
| 代理人 | 李明 |
| 國省代碼 | 天津;12 |
| 主權項 | 微生物轉化法制備雌酚酮的方法，其特征是采用微生物轉化法制備雌酚酮，即采用簡單節(jié)桿菌(ArthrobactersimplexAS1.94*)為菌種，經(jīng)制備懸液、一級種子培養(yǎng)、二級發(fā)酵培養(yǎng)、底物轉化和產(chǎn)物的分離提取；通過控制培養(yǎng)期和轉化期的相關工藝，并采用丙酮和水分離產(chǎn)物雌酚酮，獲得符合USP26版標準的雌酚酮；具體步驟如下：一、制備用于轉化底物的發(fā)酵液·菌種懸液的制備生產(chǎn)菌種為簡單節(jié)桿菌，將該生產(chǎn)菌株在瓊脂斜面上生長1-2天后，4℃保藏待用，保藏時間在20d之內(nèi)為宜；其中，制作菌體種子懸液采用的液體為無菌水或新鮮種子培養(yǎng)基，滅菌條件為：121℃，滅菌時間20～25min；·一級種子培養(yǎng)將上述制好的種子懸液加入到含碳源、氮源和無機磷組成的種子培養(yǎng)基中，在搖床上150～180r/min轉速下，30～33℃培養(yǎng)18～22h，即得適合接種的種子培養(yǎng)物；·二級發(fā)酵培養(yǎng)將生長良好的種子按2％～5％(v/v)的接種量接入到含有玉米漿、蛋白胨，葡萄糖、磷酸二氫鉀的發(fā)酵培養(yǎng)基中；在發(fā)酵過程中控制溶氧水平在30％～50％，pH值保持在6.7～7.2，培養(yǎng)18～22h，即得菌體培養(yǎng)液；·底物的轉化底物為(I)或(II)，底物(I)的結構式為：其中R1為CH3CO-、HCO-或H-；底物(II)的結構式為：其中R1為CH3CO-、HCO-或H-；R2為CH3CO-或HCO-；將底物(I)或(II)粉碎，粒度14～16μ，在無菌條件下迅速投入到培養(yǎng)好的發(fā)酵液中，投料量為12～20g/L發(fā)酵液體積，并加入消泡劑，在轉化過程中控制溶氧水平在20％～40％，pH值為7.0左右，轉化36～60h，通過薄層層析或高效液相來測定轉化率，當轉化率在70～95％時作為發(fā)酵終點；二、從發(fā)酵液中提取、分離雌酚酮該步驟包括：發(fā)酵液過濾、將固型物濾餅在丙酮中回流、過濾得粗品，保留濾液、去除菌體，再在濾液中加入純水后得到固型產(chǎn)物。具體做法如下：(1)、發(fā)酵液去除菌體底物轉化結束后，將發(fā)酵液減壓過濾，取固型物濾餅、烤干，然后加入丙酮，回流溶解至澄清，再經(jīng)過濾，保留濾液，除去菌體；(2)、產(chǎn)物的分離與精制在上述濾液中，加入相當于濾液體積2-4倍的水，有固體產(chǎn)物析出后，減壓過濾，然后用水洗滌上述固體產(chǎn)物，再經(jīng)烘干，即得質(zhì)量符合USP26版標準的雌酚酮成品(III)。 |
| 摘要 | 微生物轉化法制備雌酚酮的方法，屬于微生物制備技術。涉及以簡單節(jié)桿菌為菌種，甾體(I和II)為底物，制備雌酚酮技術。本發(fā)明解決了甾體A環(huán)芳構化的難題，為生物發(fā)酵法制備雌激素藥物提供一種新的路線和方法。其技術方案是：采用簡單節(jié)桿菌經(jīng)菌種懸液的制備、一級種子培養(yǎng)、二級發(fā)酵培養(yǎng)、底物轉化和產(chǎn)物的分離提取工序，其中底物投料量為12～20g/L發(fā)酵液，溶氧水平在30％～50％，轉化36～60h；并采用丙酮-水法特異性的分離產(chǎn)物使獲得的產(chǎn)物雌酚酮符合USP 26版標準。本發(fā)明工藝簡單、經(jīng)濟實用，提高了雌酚酮的活性和質(zhì)量，縮短了生產(chǎn)周期，降低了生產(chǎn)成本，促進綠色化工業(yè)的發(fā)展，既有經(jīng)濟效益又有社會效益。 |
| 國際公布 |
