| 公開(公告)號 | CN1233835C |
| 公開(公告)日 | 2005.12.28 |
| 申請(專利)號 | CN03130528.8 |
| 申請日期 | 2003.07.31 |
| 專利名稱 | 總狀共頭霉代謝物殺線蟲活性組分的分離純化方法 |
| 主分類號 | C12P7/44 |
| 分類號 | C12P7/44;A01N37/00;//C12P7/44,C12R1∶645 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 天津師范大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 孫建華;杜連祥;杜 淼;王海寬;王瑾玲;趙小軍;張 穎;路福平;李 喆 |
| 地址 | 300074天津市河西區(qū)衛(wèi)津路241號天津師范大學 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 天津市學苑有限責任專利代理事務所 |
| 代理人 | 李 明 |
| 國省代碼 | 天津;12 |
| 主權項 | 總狀共頭霉代謝物殺線蟲活性組分的分離純化方法，其特征是將總狀共頭霉代謝產(chǎn)物的發(fā)酵原液，采用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)、重結(jié)晶、弱堿性陰離子交換樹脂分離方法，經(jīng)過紫外、紅外光譜及X射線單晶衍射和高效液相色譜進行分析鑒定，確定了殺蟲活性組分中含有有機酸，即為乙二酸，還有蘋果酸、酒石酸和乳酸；經(jīng)濃縮重結(jié)晶技術得到含兩個結(jié)晶水的乙二酸及8配位鉀的乙二酸配合物；總狀共頭霉代謝產(chǎn)物殺線蟲活性物質(zhì)的分離純化工藝：發(fā)酵液經(jīng)真空抽濾得到發(fā)酵濾液，此后，將部分濾液即發(fā)酵原液通過離子交換柱進行層析分離，然后再通過高效液相色譜對分離組分進行檢測鑒定；另一方面將剩余濾液即發(fā)酵原液經(jīng)旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)，獲得濃縮液，再將濃縮液中析出晶體與母液分離，其中的晶體經(jīng)重結(jié)晶獲得單晶，通過紫外、紅外光譜及X射線單晶衍射進行結(jié)構(gòu)分析；其母液則經(jīng)凝膠層析進行分離純化；分離純化的具體方法：(1)殺線蟲活性組分單晶的分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定：發(fā)酵濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)濃縮10-20倍后，有晶體物質(zhì)析出，將析出的晶體在60-80℃下溶解后，冰箱冷藏室中或室溫下進行重結(jié)晶，得到一個單晶；室溫下進行重結(jié)晶得到另一個單晶；經(jīng)熔點、紫外、紅外光譜測定以及X射線晶體衍射進行結(jié)構(gòu)鑒定，證明前者為含兩個結(jié)晶水的乙二酸，其分子式為(H2C2O4)(H2O)2，后者為8配位鉀的乙二酸配合物，其分子式為K(H2C2O4)(HC2O4)(H2O)2，其結(jié)構(gòu)見圖1；二者均有殺線蟲活性，兩個結(jié)晶水的乙二酸單晶最低有效劑量即MED為2mg/ml，殺蟲活性為83％，單晶8配位鉀的乙二酸配合物的最低有效劑量MED為4mg/ml，殺蟲活性為76％；(2)濾液中有機酸的分離和鑒定：離子交換柱層析：將發(fā)酵濾液用弱堿性陰離子交換樹脂進行初步分離，上樣量10-15ml，用水或添加0.15mol/L的氯化鈉溶液平衡柱，再依次用水和稀氨水進行洗脫，流速0.5ml/min-5ml/min，分部收集到不同含量的有機酸樣品，再經(jīng)高效液相分析，酸性物質(zhì)包括乙二酸，酒石酸，蘋果酸和乳酸。 |
| 摘要 | 總狀共頭霉代謝物殺線蟲活性組分的分離純化方法，屬于開發(fā)新型殺線蟲生物制劑，特別涉及水溶性殺線蟲生物防菌代謝物及活性組分的分離純化方法。本發(fā)明克服了水溶性總狀共頭霉代謝物分離困難的問題；提供了其殺線蟲活性組份的分離與純化方法，其具體方法是將發(fā)酵原液，采用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)、重結(jié)晶、弱堿性陰離子交換樹脂分離方法，經(jīng)過紫外、紅外光譜及X射線單晶衍射和高效液相色譜進行分析鑒定。獲得了殺線蟲活性高、殺蟲譜廣、熱穩(wěn)定性強、水溶性的新型殺線蟲生物制劑；首次證明該菌代謝物中殺線蟲活性組份含帶兩個結(jié)晶水的乙二酸和具有新型結(jié)構(gòu)的8配位鉀的乙二酸配合物，此項研究對線蟲的生物防治具有重要的理論意義和廣闊的應用前景。 |
| 國際公布 |
