| 公開(公告)號 | CN1706945A |
| 公開(公告)日 | 2005.12.14 |
| 申請(專利)號 | CN200410055549.7 |
| 申請日期 | 2004.08.04 |
| 專利名稱 | rhBACE的表達(dá)純化、活性測定方法及其在藥物篩選中的應(yīng)用 |
| 主分類號 | C12N15/12 |
| 分類號 | C12N15/12;C12N15/70;C07K14/435;C07K1/14;G01N33/68 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.6.4 CN 200410044919.7 |
| 申請(專利權(quán))人 | 南京大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉建寧;王石泉;郭志剛 |
| 地址 | 210093江蘇省南京市漢口路22號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 夏 平 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種重組人beta-分泌酶蛋白的表達(dá)純化、活性測定方法，其特征在于：a.克隆重組人beta-分泌酶蛋白基因，連接到質(zhì)粒表達(dá)載體中，利用大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物為beta-分泌酶蛋白；b.表達(dá)產(chǎn)物利用Ni-NTA親和柱進(jìn)行純化；c.純化產(chǎn)物經(jīng)激活后用熒光底物進(jìn)行活性測定。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及重組人beta-分泌酶(簡稱rhBACE)的制備及活性測定方法，由此建立了rhBACE抑制劑篩選系統(tǒng)。本發(fā)明將pro-rhBACE克隆到大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒pET28a載體中，構(gòu)建pro-rhBACE-pET28a重組表達(dá)質(zhì)粒并在E.Coli Rosseta中表達(dá)。包涵體中的表達(dá)產(chǎn)物溶于6mol/L鹽酸胍，經(jīng)Ni-Sepharose親和層析純化后，得到高純度的pro-rhBACE蛋白。此蛋白在復(fù)性液中重新折疊后，于酸性條件(pH4.5)下激活，切去酶原序列，產(chǎn)生有活性的rhBACE蛋白。本發(fā)明利用人工合成的熒光17肽底物測定rhBACE活性。本方法制備的rhBACE可用于開展對阿爾茨海默病發(fā)生機(jī)理的研究及抗阿爾茨海默病藥物的篩選。 |
| 國際公布 |
