公開(公告)號
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CN1241938C
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公開(公告)日
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2006.02.15
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申請(專利)號
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CN200410022360.8
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申請日期
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2004.04.20
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專利名稱
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重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A基因工程疫苗制備中的純化方法
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主分類號
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C07K14/195(2006.01)I
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分類號
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C07K14/195(2006.01)I;C12P21/00(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學
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發(fā)明(設(shè)計)人
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鄒全明;郭 鷹;冉向陽;朱永紅;吳 超;張衛(wèi)軍;童文德
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地址
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400038重慶市沙坪壩區(qū)高灘巖正街30號第三軍醫(yī)大學醫(yī)學檢驗系臨床微生物學教研室
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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重慶華科專利事務(wù)所
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代理人
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康海燕
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國省代碼
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重慶;85
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主權(quán)項
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一種重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A基因工程疫苗制備中的純化方法,其特征在于:用發(fā)酵方式高密度表達rHspA后,采用高壓破菌、過濾,鎳離子親和層析、濃縮裂解、凝膠過濾層析及復性技術(shù)的順序組合,獲得高純度rHspA,步驟如下:(1)高壓破菌:將高效表達可溶性重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A的大腸桿菌工程菌菌體以鎳離子親和層析平衡緩沖液混懸浮,預(yù)冷后采用細胞勻漿機使其混合均勻,用高壓均質(zhì)機破菌,高速離心,收集上清;(2)過濾:將上述上清液通過微孔濾膜過濾待用;(3)鎳離子親和層析柱純化:選擇鎳離子親和層析柱進行初步純化,使用Tris在pH7.0~9.0條件下對目標蛋白進行純化,采用咪唑梯度洗脫;(4)濃縮、裂解:將步驟(3)初純化樣品濃縮后加鹽酸胍或尿素,以及DTT或β-巰基乙醇變性裂解;(5)Superdex凝膠過濾層析純化:將步驟(4)所獲得的變性蛋白樣本,用凝膠過濾柱Superdex純化,用凝膠過濾平衡緩沖液平衡;(6)復性:將步驟(5)純化樣品采用稀釋等容透析法或?qū)游鲋鶑托苑◤托,復性后的樣品,采用Superdex凝膠過濾層析分離單體和聚體。
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摘要
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本發(fā)明公開了重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A基因工程菌疫苗制備中的純化方法。采用對基因工程菌進行高壓破菌、過濾,鎳離子親和層析純化、濃縮裂解、凝膠過濾層析及復性等技術(shù),獲得高純度的重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A。該發(fā)明純化工藝簡捷、容易放大、重復性好,所獲目標蛋白純度高,動物試驗證明本發(fā)明純化獲得的重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A具有較好的免疫活性和免疫保護性。
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國際公布
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