| 公開(公告)號 | CN1243019C |
| 公開(公告)日 | 2006.02.22 |
| 申請(專利)號 | CN03158278.8 |
| 申請日期 | 2003.09.22 |
| 專利名稱 | 重組人紅細胞生成素的分離純化工藝 |
| 主分類號 | C07K14/505(2006.01)I |
| 分類號 | C07K14/505(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 南京師范大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 胡云龍;張雙全 |
| 地址 | 210097江蘇省南京市寧海路122號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 南京知識律師事務所 |
| 代理人 | 栗仲平;王東升 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 | 一種重組人紅細胞生成素的分離純化工藝，包括以下步驟：藍膠填料層析：用PB緩沖液平衡藍膠填料層析柱，用經(jīng)過微米膜過濾后細胞培養(yǎng)上清上樣，用PB緩沖液沖洗層析柱至基線，用20mMPB+0.75MNaCl緩沖液洗脫；金屬螯合親和柱層析流動相I：用0.1MEDTA-Na2+1MNaCl平衡4.0C.V，流動相II：用50％-70％異丙醇+1％-5％TFA平衡3.0C.V，流動相III：用0.1MNaAc.HAC+0.2MCuSO4.5H2O平衡3.0C.V，用20mMPB+0.5MNaCl平衡3.0C.V，用藍膠層析柱收集的洗脫蛋白峰上樣，流動相IV：用20-50mMPB+0.5-0MNaCl沖洗，收集穿透液；脫鹽柱層析用注射用水沖洗3.0C.V，用pH7.0的20mMTris-HCl緩沖液平衡層析柱3.0C.V，用金屬螯合親和層析柱收集的穿透液上樣，用pH7.0的20mMTris-HCl緩沖液洗脫，收集洗脫蛋白峰；離子交換柱層析流動相I：用20mMTris-HCl緩沖液平衡4.0C.V，用脫鹽填料柱層析收集的洗脫蛋白峰上祥，流動相II：用50mMNaCl/20mMTris-HCl緩沖液洗脫雜蛋白，流動相III：用150mMNaCI/20mMTris-Hcl緩沖液進行洗脫目的蛋白峰，收集目的蛋白峰經(jīng)過0.22微米膜過濾；以上工藝中第一步層析的藍膠填料選自BlueSepharose.FastFlow和CM-AFFI-BlueGel，第二步層析的金屬螯和親和填料選自M.C20和ChaletingSepharose.FastFlow，第三步層析的脫鹽填料選自SephadexG-25(Medium)，SephadexG-25(Fine)，第四步層析的離子交換層析填料選自SourceQ，DEAESepharose，ResourceQ，PorosD50，QSepharoseXL和QSepharoseHighperformance，QsepharoseFastFlow和QSepharoseBigBeads。 |
| 摘要 | 重組人紅細胞生成素的分離純化工藝，包括以下步驟：1、Blue sepharose.F.F層析；2、金屬螯合親和柱層析；3、Sephadex G-25柱層析；4、Source Q柱層析，收集目的蛋白峰經(jīng)過0.22微米膜過濾。本發(fā)明是一種低成本的重組人紅細胞生成素的生產(chǎn)方法。本工藝中不使用反相層析和有機溶劑，避免蛋白質(zhì)在層析過程中發(fā)生變性和有機溶劑的殘留。本工藝采用Blue Sepharose.FastFlow金屬螯和親和層析，Sephadex G-25層析和Source Q層析順序組合純化工藝路線，可以大規(guī)模制備藥用級的rHuEPO蛋白。 |
| 國際公布 |
