| 公開(公告)號 | CN1273601C |
| 公開(公告)日 | 2006.09.06 |
| 申請(專利)號 | CN200410039594.3 |
| 申請日期 | 2004.02.19 |
| 專利名稱 | 一種高效篩選目的蛋白的表達載體，其制備方法及用途 |
| 主分類號 | C12N15/64(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/64(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/67(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;C07K16/00(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所 |
| 發(fā)明(設計)人 | 陳立勇;解志剛;郭 寧;沈倍奮 |
| 地址 | 100850北京市海淀區(qū)太平路27號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權項 | 一種真核表達載體，該載體是以PCI-neo為基礎改構獲得，其特征在于：①該載體中neo基因被置換為dhfr基因；②在CMVI.E.啟動子后連入的是記載于GENBANK登錄號為A22466和A22467的anti-c-erbB2-scFv基因及人抗體基因IgGlFc段基因；③IgGlFc段基因之后連入白細胞介素2基因，抗體基因和IL-2基因一起構成融合基因；④融合基因后面連入內部核糖體進入位點IRES序列和第546位鳥嘌呤突變?yōu)樾叵汆奏さ耐蛔僋eo基因；⑤該雙順反子表達載體被命名為pCMV-HFI-mNeo。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種高效篩選目的蛋白的表達載體，其制備方法及用途。發(fā)明人通過在含有CMV啟動子和dhfr擴增系統(tǒng)的真核表達載體中引入一個內部核糖體進入位點，將anti-erbB2-scFv-Fc基因與IL-2的融合基因與新霉素抗性基因連接。利用PCR方法對Neo基因進行點突變，構建成表達載體pCMV-HFI-mNeo。本載體特點在于通過引入IRES使融合蛋白基因和Neo基因在同一個啟動子啟動下共表達；通過對Neo基因的點突變弱化Neo基因表達產物活性，從而提高了陽性表達克隆的篩選效率，大大減少了篩選工作量，獲得了目的基因的穩(wěn)定高效表達克隆。 |
| 國際公布 |
