公開(公告)號
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CN1274830C
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公開(公告)日
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2006.09.13
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申請(專利)號
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CN01144257.3
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申請日期
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2001.12.14
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專利名稱
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一種新型鮭魚降鈣素類似物及其在植物油體中表達(dá)的方法
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主分類號
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C12N15/16(2006.01)I
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分類號
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C12N15/16(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N15/82(2006.01)I;C12N15/29(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;C07K14/575(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所
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發(fā)明(設(shè)計)人
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賈士榮;劉昱輝
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地址
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100081北京市中關(guān)村南大街12號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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北京萬科園知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
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代理人
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張亞軍;曹詩健
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國省代碼
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北京;11
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主權(quán)項
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一種編碼鮭魚降鈣素類似物msCT(31aa)的基因msCT[Trp1,Ser6,Phe7,del-Leu19],其編碼產(chǎn)物的氨基酸序列結(jié)構(gòu)為:Trp-Ser-Asn-Leu-Ser-Ser-Phe-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2,即將天然鮭魚降鈣素的第1位氨基酸Cys突變?yōu)門rp,第6位的Thr突變?yōu)镾er,第7位的Cys突變?yōu)镻he,第19位的Leu缺失。
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摘要
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本發(fā)明采用基因工程技術(shù),克隆了一種新型鮭魚降鈣素類似物的基因msCT(31aa),并建立了油體蛋白(oleosin)與目的蛋白融合的基因表達(dá)體系。其中包括:(1)分離和克隆了油菜油體蛋白基因的啟動子及編碼芝麻油體蛋白的結(jié)構(gòu)基因;(2)設(shè)計合成了編碼鮭魚降鈣素類似物msCT[Trp1,Ser6,Phe7,del-Leu19]的基因msCT,將其插在芝麻油體蛋白基因的C端;(3)構(gòu)建了由油菜油體蛋白基因啟動子驅(qū)動的芝麻油體蛋白-msCT融合基因植物表達(dá)載體,分別用農(nóng)桿菌法和花粉管通道法轉(zhuǎn)化油菜和棉花,分別獲得轉(zhuǎn)基因植株及株系。(4)轉(zhuǎn)基因油菜和棉花的分子生物學(xué)檢測證明外源基因的整合和表達(dá)。本發(fā)明的新型降鈣素類似物,其生物活性為6000~8000U/mg,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過天然鮭魚降鈣素4,500U/mg和人降鈣素150U/mg,該鮭魚降鈣素類似物具有降低血鈣的作用,可用于治療骨質(zhì)疏松、Paget’s癥、骨痛及各種高血鈣癥等。
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國際公布
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