| 公開(公告)號 | CN1936009A |
| 公開(公告)日 | 2007.03.28 |
| 申請(專利)號 | CN200510017148.7 |
| 申請日期 | 2005.09.21 |
| 專利名稱 | 禽流感病毒基質(zhì)蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表達(dá)制備 |
| 主分類號 | C12N15/63(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/63(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C12N15/13(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 金寧一 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 金寧一;徐一鳴;魯會軍;李 昌;韓 松;金擴(kuò)世 |
| 地址 | 130062吉林省長春市青龍路1068號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 白冬冬 |
| 國省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項 | 一種禽流感病毒基質(zhì)蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表達(dá)制備方法，其特征在于： 首先構(gòu)建質(zhì)粒pPIC9K-M-Np：將pMD18-T-M質(zhì)粒由EcoR I、EcoRV雙酶切并回收；pMD18-T-Np質(zhì)粒由EcoR I、EcoRV雙酶切并回收；將以上回收產(chǎn)物經(jīng)T4連接酶連接后即獲得中間質(zhì)粒pMD18-T-M-Np；pMD18-T-M-Np經(jīng)EcoR I、Not I雙酶切并回收；pPIC9K質(zhì)粒由EcoR I、Not I雙酶切并回收；將以上回收產(chǎn)物經(jīng)T4連接酶連接后即獲得目的質(zhì)粒pPIC9K-M-Np； 然后M-Np蛋白畢赤酵母真核表達(dá)及制備：用Bpu1102I線性化pPIC9K-M-Np重組質(zhì)粒；線性化后將其電轉(zhuǎn)化至GS115感受態(tài)中，在MD平板中培養(yǎng)，而后挑取單個菌落于YPD培養(yǎng)基中復(fù)蘇，提重組體基因組進(jìn)行PCR鑒定，篩選出的陽性菌株于BMGY培養(yǎng)基中搖菌，離心后轉(zhuǎn)至BMMY培養(yǎng)基中開始甲醇誘導(dǎo)，產(chǎn)物離心后取上清，加入飽和硫酸銨沉淀蛋白，離心收集即得M-Np抗原蛋白。 |
| 摘要 | 一種禽流感病毒基質(zhì)蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表達(dá)制備方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種AIV融合抗原蛋白及制備。本發(fā)明提供一種由兩種AIV抗原蛋白組成的融合抗原蛋白，能有效檢測致病率很高的A型禽流感病毒基質(zhì)蛋白及核蛋白的抗體的禽流感病毒基質(zhì)蛋白及核蛋白融合抗原蛋白的表達(dá)制備。本發(fā)明首先構(gòu)建質(zhì)粒pPIC9K-M-Np，然后M-Np蛋白畢赤酵母真核表達(dá)及制備。本發(fā)明開展了利用畢赤酵母真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)制備的M-Np融合抗原蛋白的研究。其表達(dá)量高、特異性強、易于純化、具有完整的空間構(gòu)象等特點完全符合ELISA快速檢測試劑盒的鑒定要求。 |
| 國際公布 |
