天花粉蛋白

    1.致流產(chǎn)和抗早孕作用
用天花粉蛋白粗制劑,給孕期10～20d小鼠每只皮下注射0.2mg,五d后解剖,記錄胎仔總數(shù)及死仔數(shù)(包括吸收點)計算有效率在75%以上,給5只孕期30d以上的犬肌注0.5mg/kg,能命名胎犬死亡并娩出,給孕期14d左右的每只兔肌注4mg或陰道內(nèi)給藥32mg,5～7d后剖腹檢查,也有致流產(chǎn)作用,體外培養(yǎng)試驗,對孕期5d的兔胚泡有損傷作用:注射于早孕兔亦有明顯明顯抗早孕效果,可使胚泡壞死、液化,終致完全吸收。
經(jīng)I-天花粉粗提物在孕婦體內(nèi)的分布與排泄試驗,間接熒光標記抗體法追蹤妊娠小鼠體內(nèi)不同時間的天花粉蛋白抗原分布動態(tài),獼猴及人流產(chǎn)胎盤的病理學(xué)觀察和臨床病理現(xiàn)象分析,天花粉蛋白對體外培養(yǎng)人胎盤絨毛滋養(yǎng)層細胞形態(tài)和功能損傷的觀察,天花粉蛋白引產(chǎn)前后血清內(nèi)絨毛膜種性腺激素(雙抗體免疫法)及尿中孕二醇、雌三醇(氣相層析法)的含量測定,以及抑制內(nèi)源前列腺合成對天花粉蛋白引產(chǎn)的影響等方面的研究結(jié)果,互相驗證,可對天花粉蛋白的致流產(chǎn)作用原理歸納如下:天花粉蛋白直接作用于胎盤滋養(yǎng)層細胞,并有一定的細胞專一性;能選擇地使胎盤絨毛合體滋養(yǎng)層細胞變性壞死,解體的細胞碎片留在血竇中引起凝血,造成循環(huán)障礙和進一步的大量組織壞死:胎盤絨毛的損傷反映在功能方面,即絨毛膜促性腺激素和類固醇激素迅速下降到先兆流產(chǎn)的臨界水平以下,由于胎盤形態(tài)和功能嚴重損傷的結(jié)果,破壞了母體和胎兒之間的內(nèi)分泌聯(lián)系的代謝物的交換,使胎兒死亡,并假定可能通過尚未清楚的機制引起前列腺素合成增加,發(fā)動宮縮而導(dǎo)致流產(chǎn)。天花粉蛋白能使小鼠離體子宮、兔在體子宮及慢性子宮瘺管收縮增強,并能提高子宮對垂體后葉素的敏感性,故認為其對子宮平滑肌有直接興奮作用,可能也是導(dǎo)致流產(chǎn)的因素之一。注射用天花粉能促進妊娠后期大鼠娩出胎鼠并增強其在位子宮的自發(fā)活動。該藥物提高妊娠大鼠子宮PGF2α含量,對動物血漿和子宮孕酮濃度則無明顯影響,可見該藥促進子宮PGF2。合成和釋放是增強妊娠子宮自發(fā)活動的重要原因。
2.免疫學(xué)影響
(1)對肥大細胞脫顆粒和組胺釋放的影響
首先用Alcian藍染色的肥大細胞脫顆粒試驗和用熒光測定組胺的方法觀察了天花粉蛋白對肥大細胞脫顆粒和組胺釋放的影響。結(jié)果表明:①在體外試驗中,不論有無血清的存在,天花粉蛋白都不引起肥大細胞的脫粒和組胺釋放。②天花粉蛋白的體內(nèi)用藥,能引起B(yǎng)alb/c小鼠炎癥局部的肥大細胞脫顆粒和組胺水平的明顯提高。③腹膜腔內(nèi)注射天花粉蛋白后,WISTATR大鼠腹膜腔內(nèi)蛋白明顯滲出,同時全血組胺水平也明顯提高。④上述天花粉蛋白誘導(dǎo)的腹腔滲出液具有明顯的肥大細胞脫顆粒作用,⑤用眼鏡蛇毒素完全耗竭小鼠的補體對天花粉蛋白引起的肥大細胞脫粒因子的產(chǎn)生無明顯影響,可見,天花粉蛋白的體內(nèi)應(yīng)用能通過激活某些可溶性成分的產(chǎn)生而引起肥大細胞的脫顆粒和組胺的釋放,但這一過程與天花粉蛋白激活補體的作用無明顯關(guān)系。
(2)對激肽系統(tǒng)的激活作用
天花粉蛋白對激肽系統(tǒng)有激活作用,實驗組激肽釋放酶活力單位為190±14mμ/ml,對照組為149±14mμ/ml,P<0.01;天花粉蛋白裂解片段CBTf1同樣可以激活激肽系統(tǒng),而CBTf2對激肽系統(tǒng)無影響。天花粉蛋白引起臨床過敏反應(yīng)及類過敏反應(yīng)可能與激肽系統(tǒng)的激活有關(guān)。
(3)誘發(fā)人體免疫抑制的遺傳控制
去除CD8陽性細胞或作相應(yīng)單抗的封阻,可使天花粉蛋白體外誘發(fā)的免疫低反應(yīng)得到回復(fù),然而這一現(xiàn)象僅見于一部分受試者,對其余受試者清除或封阻CD8細胞后低反應(yīng)保持不變甚至略有加劇,正常人因而區(qū)分為cd8介導(dǎo)型(M+)及非介導(dǎo)型(M－)兩類個體。進一步研究表明:①M+和M-是可重復(fù)的穩(wěn)定性狀。②這一區(qū)分僅見于同種異體免疫應(yīng)答而非PHA誘發(fā)的細胞增殖。③只有MLR反應(yīng),細胞一方去除CD細胞方能顯示上述差異與刺激細胞遺傳背景及是否帶有CD8細胞無關(guān)。④天花粉蛋白致敏細胞作短期培養(yǎng),僅M+個體上清液顯示免疫抑制活性。
根據(jù)CD8陰性細胞在天花粉蛋白作用下是否表達抑制功能,將68名隨機正常人區(qū)分為21名CD8介導(dǎo)型個體(M+)和47名非介導(dǎo)型個體(M一),介導(dǎo)系數(shù)均值分別為13.4和-5.6。根據(jù)群體中介導(dǎo)系數(shù)變異的雙峰性分布,推斷M+的M-所顯示的免疫學(xué)特征屬于單基因控制的遺傳性狀,相應(yīng)等位基因頻率分別為0.1686和0.8314。由于M-在天花粉蛋白作用下不顯示CD8參與的免疫低反應(yīng)性,該類個體免疫應(yīng)答強度應(yīng)高于 M+,經(jīng)測定,兩者相對反應(yīng)值相差12.5%～12.7%。
3.抗癌作用
臨床證實,天花粉蛋白對胎盤滋養(yǎng)葉細胞腫瘤有一定療效。腹腔注射5mg/kg,對小鼠實驗性肝癌腹水型也有一定治療作用,可減少腹水量,延長存活期;對移植性肝癌實體瘤也有輕度抑制作用。精制天花粉蛋白和結(jié)晶天花粉蛋白對離體絨癌細胞增殖有抑制作用,其中精制天花粉蛋白的IC50 為16.0μg/ml,結(jié)晶天花粉蛋白IC50 為3.3μg/ml。
4.體內(nèi)過程
據(jù)I-天花粉粗提物在孕婦或獼猴體內(nèi)的分布與排泄、間接熒光標記抗體法或整放射自顯影法追蹤妊娠小鼠體內(nèi)不同時間的天花粉蛋白抗原或I標記的天花粉蛋白分布動態(tài),放射免疫法測定孕婦血清或孕猴體內(nèi)天花粉蛋白抗原成分的分布,以及惡性葡萄胎患者靜脈滴注I-天花粉粗提物等試驗結(jié)果,揭示天花粉蛋白肌注后10min即在血清中出現(xiàn),4h后局部存留量約為給藥量的3/5,24h后只有給藥量的3/10左右。肌注1h后以腎皮質(zhì)和腸內(nèi)糞便含量為最高,其次為胎盤組織,而肝、脾、肺中含量較低,超過16h則表現(xiàn)為游離碘的分布特點。子宮肌、胎兒肝組織及紅血球亦均含有天花粉蛋白,但羊水內(nèi)并無滲入。血清中天花粉蛋白于肌注后4h達高峰,此時血循環(huán)中出現(xiàn)的瞬時最大總量近似于肌注量的5%,第8h已遞減一半,第24h僅有高峰量的1/7。肌注16h后,除腎皮質(zhì)外,其他組織中含量均已很少。經(jīng)尿排泄的高峰出現(xiàn)時間與血高峰濃度出現(xiàn)時間基本一致,且未被降解。靜脈內(nèi)給藥后,在血循環(huán)中消失一半所需的時間約為1h。先是肝臟濃度很高,而后腎臟與膽汁中含量上升。24h內(nèi)經(jīng)尿總排出率可達67%。羊膜腔內(nèi)注射時,母體血清中檢測不出天花粉蛋白,經(jīng)尿排出量甚少,大多保留在腔內(nèi),直到流產(chǎn)時才隨羊水排出體個,流產(chǎn)后測定羊水、羊膜、平滑絨毛和胎盤中I標記的天花粉蛋白,隨解剖學(xué)位置由內(nèi)向外含量逐漸降低,且胎兒血清中也含有一定量以上材料說明,天花粉蛋白肌注容易吸收;經(jīng)靜脈給藥,開始集中在肝臟,而后經(jīng)腎臟和膽汁排泄,藥物及其代謝產(chǎn)物從體內(nèi)清除較為迅速。羊膜腔內(nèi)給藥,天花粉蛋白只能緩慢地透過羊膜和胎盤屏障,進入母體血循環(huán)的量甚小,故全身副反應(yīng)也比靜脈給藥及肌注為輕。雖然天花粉蛋白對細胞的結(jié)合專一性并不很強,但無論靜脈給藥、肌注及羊膜腔內(nèi)注射,其在胎盤上均有一定的選擇性積累,且能迅速進入胎兒組織。