苦丁茶老葉—熊果酸的含量測定方法—HPLC

儀器   Waters 600 型四元液相色譜泵，Waters996型光電二極管陣列檢測器，WatersM32色譜工作站，1 mL 0ASISR HLB Cartridge固相萃取小柱（WATERS公司)

色譜條件  色譜柱：N0va—Pak C18 （3.9 mm×150 mm，4.0 μm)；流動相：甲醇—水—磷酸（體積比85∶15∶0.1)；檢測波長：220 nm；流速：0.8 mL/min；柱溫：30 ℃

對照品溶液制備  　精密稱取熊果酸對照品8.34 mg，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得濃度為0.834 mg/mL的對照品溶液，用時稀釋適當倍數，即得。

供試品溶液制備　  稱取約10 g苦丁茶老葉，剪碎，加入80 %（體積分數)乙醇溶液160 mL，于85 ℃水浴回流提取2次，每次2.5 h；合并提取液，濾過，濾液于85 ℃水浴揮干，殘渣以甲醇溶解并定容至10 mL，以0.45 μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液1.0 mL移入經活化的固相萃取小柱，以重整水2 mL、30 %甲醇2 mL依次以3滴/s的速度進行洗脫，最后用80 %甲醇2 mL以3滴/s的速度進行洗脫，收集末次洗脫液，即得供試品溶液。