風(fēng)濕骨痛膠囊—總生物堿的測(cè)定—分光光度法

本方法采用分光光度法測(cè)定風(fēng)濕骨痛膠囊中總生物堿（以烏頭堿計(jì)算)的含量。

本方法適用于中成藥風(fēng)濕骨痛膠囊。

供試品經(jīng)氨試液及混合溶劑（乙醚-氯仿-無(wú)水乙醇)提取，提取液移至分液漏斗中用0.05mol/L硫酸溶液提取，提取液氨堿化后用氯仿提取數(shù)次，合并氯仿液，定容。取一定量在pH3.0緩沖液中與溴甲酚綠反應(yīng)后，分出氯仿置于分光光度計(jì)，于波長(zhǎng)412nm處測(cè)定吸收度，按烏頭堿（C₃₄H₄₇NO₁₁)計(jì)算其含量。

1. 乙醚

2 .氯仿

3 .無(wú)水乙醇

4 .氨試液 取濃氨溶液400mL，加水使成1000mL。

5 .濃氨試液 取用“濃氨溶液”。

6 .0.05mol/L硫酸溶液

7 .pH3.0醋酸鹽緩沖液 稱取無(wú)水醋酸鈉0.15g，加水使溶解，加冰醋酸5.6mL,用水稀釋至500mL，搖勻，并在pH計(jì)上校正.

8. 0.1%溴甲酚綠 取溴甲酚綠0.2g，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液3.2mL使溶解，用水稀釋至200mL，搖勻。

可見分光光度計(jì)

1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取105℃干燥至恒重的烏頭堿對(duì)照品10mg，置100mL量瓶中，加氯仿溶解并稀釋至刻度，混勻，制成每1mL含烏頭堿0.1mg的溶液。

2. 供試品溶液的制備

精密稱取供試品試樣1g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醚-氯仿-無(wú)水乙醇（16∶8∶1)的混合溶液25mL和氨試液1.5mL，搖勻，稱定重量，于快速混勻器上振蕩三次，每次振蕩2分鐘，放置過夜，稱定重量，用上述混合溶液補(bǔ)足減失的重量，再于快速混勻器上振蕩2分鐘，靜置，傾取上清液，精密量取5mL，置分液漏斗中，加乙醚5mL，用0.05mol/L硫酸溶液提取4次，每次10mL，分取硫酸液，濾過，合并濾液，置另一分液漏斗中，加濃氨試液4 mL，搖勻，用氯仿提取4次，每次10mL，分取氯仿層，濾過，合并濾液，蒸干，殘?jiān)��?05℃ 加熱1小時(shí)，取出，放冷，加氯仿分次溶解，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，搖勻, 作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取對(duì)照品溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，分別置分液漏斗中，依次精密加入氯仿20mL，再精密加入pH3.0醋酸鹽緩沖液10mL，和0.1%溴甲酚綠溶液2.0mL，強(qiáng)力振搖5分鐘，靜置20分鐘，分取氯仿層，以干燥濾紙過濾，濾液照分光光度法，分別在412nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.供試品的測(cè)定

精密量取上述供試品溶液20mL，置分液漏斗中， 照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定項(xiàng)下的方法，自“加pH3.0醋酸鹽緩沖液10mL”起，依法測(cè)定吸收度。

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部，p.395。