凝血酶凍干粉針—凝血酶的測定—酶效價測定法

本方法采用酶效價測定法測定凝血酶凍干粉針中凝血酶的效價。

本法系比較不同濃度凝血酶標準品（S)與供試品（T)對纖維蛋白原的初凝時間，以測定供試品的效價。

1. 纖維蛋白原

2. 0.9％氯化鈉溶液

3. 0.05mol/L磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉溶液

1. 纖維蛋白原溶液的制備

取纖維蛋白原約30mg，精密稱定，用0.9％氯化鈉溶液1.5mL溶解，加凝血酶溶液0.1mL（約3單位)，快速搖勻，室溫放置約1小時至完全凝固，取出凝固物，用水洗至洗出液加硝酸銀試液不產(chǎn)生混濁，在105°C干燥3小時，稱取重量，計算纖維蛋白原中漢凝固物質的含量（％)，然后用0.9％氯化鈉溶液制成含0.2％凝固物的纖維蛋白原溶液，用0.05mol/L磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉溶液調節(jié)pH值至7.0～7.4，再用0.9％氯化鈉溶液稀釋成含0.1％凝固物的溶液，備用。

2. 標準曲線的制備

取凝血酶標準品，用0.9％氯化鈉溶液分別制成每1mL中含5.0單位，6.4單位，8.0單位，10.0單位的標準品溶液。另取內(nèi)經(jīng)1cm，長10cm的 試管4支，各精密加入纖維蛋白原溶液0.9mL，置37±5°C的水浴中保溫5分鐘，再分別精密量取上述4種濃度的標準品溶液各0.1mL，迅速加入上述各試管中，搖勻，立即計時，置37±5°C的水浴中，觀察纖維蛋白的 初凝時間，每種濃度測5次，求平均值（5次測定中的最大值與最小值的差不得超過平均值的10％，否則重測)。標準品溶液的濃度應控制凝結時間在14～60秒為宜。在雙對數(shù)坐標紙上，以標準品效價（單位)為橫坐標，凝結時間（秒)為縱坐標，計算回歸方程。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

取本品3評，分別精密稱定其內(nèi)容物的重量，每瓶按標示量分別加0.9％氯化鈉溶液制成與標準曲線濃度相當?shù)娜芤海�精密吸�?.1mL，按標準曲線的制備方法平行測定5次，求出凝結時間的平均值（誤差要求同標準曲線)，用回歸方程求得效價（單位)

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.866。