醫(yī)學(xué)免費(fèi)論文:雷帕霉素對(duì)小鼠H22肝癌細(xì)胞生長增殖的影響

各組小鼠皮下移植瘤瘤塊中均可見到CD34陽性染色，腫瘤組織內(nèi)的血管內(nèi)皮CD34呈強(qiáng)免疫反應(yīng)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)原則計(jì)算標(biāo)本的微血管密度(MVD)(表4)。應(yīng)用實(shí)驗(yàn)劑量的RPM可以顯著地減少瘤組織內(nèi)的微血管密度，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其余各組MVD值與對(duì)照組相比沒有顯著差異。表4 小鼠瘤組織內(nèi)MVD的測定結(jié)果(略)

3 討 論

肝膽惡性腫瘤患者移植術(shù)后2年內(nèi)肝癌復(fù)發(fā)率高于60%[1]，免疫抑制劑的使用可加速腫瘤生長[2]。術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)成為阻礙肝癌肝移植臨床廣泛開展的最主要問題之一。由于作用機(jī)理、作用環(huán)節(jié)不同，不同的免疫抑制劑的免疫抑制作用與效果也不同。應(yīng)用大劑量糖皮質(zhì)激素作為免疫抑制劑時(shí)，肝癌肝移植術(shù)后肝癌復(fù)發(fā)率顯著增高[3]。選用新的免疫抑制劑有可能降低肝移植術(shù)后肝癌的復(fù)發(fā)率醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站gydjdsj.org.cn。

RPM是鏈霉菌屬絲狀菌發(fā)酵產(chǎn)生的一種具有抗真菌作用的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。1999年，美國FDA批準(zhǔn)RPM應(yīng)用于臨床器官移植。RPM發(fā)揮免疫抑制作用的機(jī)制包括[4��5]：①通過抑制真核生物啟動(dòng)因子4E�步Y(jié)合蛋白��1(4E�睟Pl)的磷酸化，阻止eIF��4E的釋放和轉(zhuǎn)錄;②抑制P27介導(dǎo)的cdk��2細(xì)胞周期素的激活和DNA的合成;③抑制P70S6激酶活化，阻遏核糖體蛋白S6磷酸化，減少核糖體/轉(zhuǎn)錄蛋白的合成，最終抑制T細(xì)胞Gl后期向S期過渡。

本研究中，RPM具有同CsA、FK506同效的免疫抑制作用，均顯著延長了皮膚移植物生存時(shí)間。但是，僅RPM顯著抑制H22肝細(xì)胞癌株的生長增殖。

RPM對(duì)于細(xì)胞周期的影響是其成為免疫抑制劑的基礎(chǔ)之一，也是其具有抗腫瘤特性的主要因素。在本實(shí)驗(yàn)中，我們觀察到劑量為0.01、0.1、1mg/L的RPM與對(duì)數(shù)生長的H22肝細(xì)胞癌株分別共同培養(yǎng)48h后，表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒性作用。同時(shí)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)的劑量為1mg/L的CsA和0.1mg/L的FK506對(duì)于H22肝細(xì)胞癌細(xì)胞沒有明顯的抑制作用。在細(xì)胞周期分析中可見到在不同濃度的RPM作用下，對(duì)H22小鼠肝癌細(xì)胞周期的影響表現(xiàn)為G0/G1期細(xì)胞數(shù)增多而S期細(xì)胞數(shù)減少。1mg/L的CsA和0.1mg/L的FK506與H22肝細(xì)胞癌細(xì)胞共同培養(yǎng)，沒有增加其細(xì)胞周期G0/G1期細(xì)胞數(shù)。提示RPM具有將H22細(xì)胞生長阻滯在G0/G1期的效果。這與國外學(xué)者SCHUMACHER[6]對(duì)于人肝癌細(xì)胞株體外培養(yǎng)的研究結(jié)果基本一致。

RPM抑制腫瘤增殖的作用還被發(fā)現(xiàn)與其能夠抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)劑量為0.01、0.1、1mg/L的RPM與H22小鼠肝細(xì)胞癌細(xì)胞株共同培養(yǎng)48h后，培養(yǎng)液上清中VEGF濃度顯著減低(P<0.05)，提示不同劑量的RPM均具有顯著抑制H22小鼠肝細(xì)胞癌細(xì)胞生成VEGF的能力。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)劑量的RPM可降低荷瘤小鼠血清中的VEGF濃度，有效抑制了瘤組織內(nèi)腫瘤血管形成，使微血管密度(MVD)由52.60降至23.77～26.90，在此基礎(chǔ)上RPM顯著抑制了H22細(xì)胞增殖，使瘤體積較對(duì)照組縮小。證實(shí)RPM抑制腫瘤生長與抑制腫瘤新生血管形成密切相關(guān)，這與GUBA等[7]在結(jié)腸腺癌細(xì)胞形成肝臟轉(zhuǎn)移瘤模型上的實(shí)驗(yàn)結(jié)論類似。上海中山醫(yī)院關(guān)于人肝癌細(xì)胞株的研究也證實(shí)這一結(jié)果[8]。

本研究中，臨床常用的免疫抑制劑CsA、FK506都表現(xiàn)出顯著促進(jìn)H22皮下移植瘤增殖的現(xiàn)象，而RPM作為一個(gè)高效的免疫抑制劑的同時(shí)具有與經(jīng)典化療藥物5�睩U效果類似的抗腫瘤增殖特性。上海中山醫(yī)院的臨床肝移植經(jīng)驗(yàn)初步提示，RPM可以改善超過米蘭標(biāo)準(zhǔn)的肝癌肝移植預(yù)后[9]。因此，RPM替代CsA可能會(huì)減少癌癥在高危移植病人中的發(fā)生或再發(fā)[9��11]。相信在未來RPM將在肝臟移植術(shù)后免疫抑制治療中占據(jù)應(yīng)有的地位。特別是體外實(shí)驗(yàn)研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，RPM具有抗腫瘤增殖的特點(diǎn)，它將會(huì)在肝移植治療肝臟惡性腫瘤方面發(fā)揮其優(yōu)勢。

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