第八章 循環(huán)系統(tǒng)
第一節(jié) 電解質(zhì)及藥物對離體心臟活動的影響
［實驗?zāi)康模?/p>
（1)掌握straud離體蛙心的灌流方法。
（2)觀察鈉、鉀、鈣三種離子與腎上腺素、異丙腎上腺素、去甲腎上腺素、 Ach、 強心甙、氨茶堿等對離體心臟的作用。
［實驗動物］
蟾蜍或青蛙性別不拘
［藥品、器材］
生物信息記錄儀、張力傳感器、蛙類手術(shù)器械一套、玻璃分針、濾紙、棉球、澆杯2個、縫線、滴管2支、蛙心夾 、鐵支架、雙凹夾2個、試管夾、蛙心插管、任氏液、0.65%NaCl、3%ＣaCl2、1%KCI,1:10 000腎上腺素、1:100 000Ach、1:10000異丙腎上腺素、25:1000氨茶堿(2.5%)、25:100 000毒K(0.025%)。
［觀察指標(biāo)］
心功能：心跳頻率、幅度，心搏曲線和舒縮程度
［方法、步驟］
1.離體蛙心制備
取蟾蜍一只，破壞腦和脊髓后，仰臥固定在蛙板上，從劍突下將胸部皮膚向上剪開，然后剪開胸骨和胸膜，暴露心臟（圖8-1)。
在主動脈干下方引兩根線，一條在主動脈上端結(jié)扎作插管時牽引用，另一根則在動脈圓錐上方，糸一松結(jié)用于結(jié)扎固定蛙心插管。
圖8-1暴露蛙心
左手持左主動脈遠(yuǎn)心端的結(jié)扎線，用眼科剪在松結(jié)上方左主動脈根部剪一小斜口，右手將盛有少許任氏液，大小適宜的蛙心插管由此剪口處插入動脈圓錐，當(dāng)插管頭到達動脈圓錐時，再將插管稍向后退，并轉(zhuǎn)向心室中央方向，在心室收縮期插入心室，判斷蛙心插管是否進入心室可根據(jù)插管內(nèi)的任氏液液面能否隨心室的舒縮而上下波動。如蛙心插管已進入心室，則將預(yù)先準(zhǔn)備好的松結(jié)扎緊，并固定在蛙心插管的側(cè)鉤上以免蛙心插管滑出心室。剪斷主動脈左右分支。
輕輕提起蛙心插管以抬高心臟，用一線在靜脈竇與腔靜脈交界處作一結(jié)扎，結(jié)扎線應(yīng)盡量下壓，以免傷及靜脈竇，在結(jié)扎線外側(cè)剪斷所有組織，將蛙心游離出來。
用新鮮的任氏液反復(fù)換洗蛙心插管內(nèi)含血的任氏液，直至蛙心插管內(nèi)無血液殘留為止，此時離體蛙心已制備成功，可供實驗。
2.儀器裝置
按圖8-2連接實驗裝置，依儀器使用方法調(diào)試好記錄儀。將蛙心插管固定在鐵支架上，用蛙心夾在心室舒張期夾住心尖，并將蛙心夾的線頭連至張力傳感器的應(yīng)變片上，此線應(yīng)有適宜的緊張度。
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圖8-2 實驗記錄裝置
3.觀察項目：
（1)描記正常蛙心搏動曲線，注意觀察心跳頻率、幅度及心室舒縮程度。
（2)把蛙心插管內(nèi)的任氏液全部更換為0.65%NaCl溶液，觀察心跳變化。
（3)把0.65%NaCl吸出，用新鮮任氏液反復(fù)換洗數(shù)次，待曲線恢復(fù)正常時，在任氏液內(nèi)滴加3%CaCl2 1～2滴，觀察心功能變化。
（4)將含有CaCl2任氏液吸出，用新鮮的任氏液反復(fù)換洗，等曲線恢復(fù)正常后在任氏液中加1%KCI 1～2滴，觀察心功能變化。
（5)速將含有KCI的任氏液吸出，用新鮮的任氏液反復(fù)換洗，等待曲線恢復(fù)正常后，再在任氏液中加1：10000腎上腺素溶液1～2滴，觀察心功能的變化。
（6)腎上腺素的任氏液吸出，用新鮮的任氏液反復(fù)換洗，待曲線恢復(fù)正常后，再在任氏液中加入1：100000的Ach1～2滴，觀察心功能變化。
（7)將含有Ach的任氏液吸出，用新鮮的任氏液反復(fù)換洗，待曲線恢復(fù)正常后，再在任氏液中加入1：10000異丙腎上腺素1～2滴，觀察心功能的變化。
（8)將含有異丙腎上腺素的任氏液吸出，用新鮮的任氏液反復(fù)換洗，待曲線恢復(fù)正常后，再將插管內(nèi)任氏液換成鈣離子任氏液，觀察心功能變化。
（9)當(dāng)心力出現(xiàn)衰竭時，加入25：100 000的毒K 0.3ml觀察心功能變化，然后重復(fù)（8)。
（10)當(dāng)心力出現(xiàn)衰竭時，加入25:10 000氨茶堿0.3ml，觀察心功能變化。
［注意事項］
(1)制備蛙心標(biāo)本時，勿傷及靜脈竇。
(2)上述各實驗項目，一旦出現(xiàn)變化就應(yīng)立即用新鮮任氏液換洗，以免心肌受損，但必須待心功能恢復(fù)正常后方能進行下一步實驗。
(3)蛙心插管液面應(yīng)保持恒定，以免影響結(jié)果。
(4)滴加藥品和換取新鮮任氏液須及時標(biāo)記，以便觀察分析。
(5)吸新鮮任氏液和吸蛙心插管內(nèi)廢液的滴管應(yīng)區(qū)分專用，不可混淆使用，以免影響實驗結(jié)果。
（6)藥物作用不明顯時，可適量增加，密切觀察藥物劑量添加后的實驗結(jié)果。
［思考題］
（1)正常蛙心搏動曲線各個組成部分，分別反映了什么？
（2)分析加入各種離子或藥品后心搏曲線變化的原因。
(胡 弼)
第二節(jié) 急性犬失血性休克及救治
&nwww.med126.combsp; ［實驗?zāi)康模?/p>
(1)用放血的方法復(fù)制犬失血性休克模型。
(2)觀察失血前和失血性休克后血流動力學(xué)改變和微循環(huán)變化。
(3)探討失血性休克的發(fā)生機理，熟悉救治措施。
(4)觀察補充血容量和給血管活性藥物治療后血流動力學(xué)改變和微循環(huán)變化。
［實驗動物］
家犬，性別不拘。
［藥品、器材］
3％戊巴比妥鈉、125單位/ml肝素生理鹽水、生理鹽水、微循環(huán)灌流液(臺氏液加1％明膠)、5％葡萄糖液、酚妥拉明，手術(shù)器械，10ml、20ml、50ml注射器，100ml燒杯、儲血瓶，輸尿管插管、動脈導(dǎo)管及壓力傳感器、靜脈導(dǎo)管及壓力傳感器、呼吸傳感器、微循環(huán)觀察裝置(灌流盒、連續(xù)變倍顯微鏡)，生物信息采集處理儀，AVL血氣分析儀。
［觀察指標(biāo)］
(1)血流動力學(xué)指標(biāo)：動脈血壓、脈壓差、心率、中心靜脈壓。
(2)微循環(huán)指標(biāo)：微血管內(nèi)血流速度、微血管直徑、毛細(xì)血管數(shù)/固定視野內(nèi)、白細(xì)胞附壁及嵌塞。
(3)尿量(滴或ml/min)。
(4)呼吸頻率與幅度。
(5)休克前和休克后血氣和酸堿指標(biāo)變化：動脈血pH、PaO2、PaCO2、AB、SB和BE。
［方法、步驟］
(1)取成年家犬一只，稱重后靜脈注射3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)全身麻醉。
(2)將麻醉犬仰臥固定于犬實驗臺，頸前部和腹股溝部備皮。作長6～8cm的頸部正中切口，分離出氣管，在甲狀軟骨下2～3cm處作倒“T”形切口，插入Y型氣管插管并固定，Y型管一側(cè)與呼吸傳感器相連，信號傳入生物信息采集處理儀記錄呼吸變化。
(3)分離左頸總動脈，插入動脈導(dǎo)管，壓力信號經(jīng)壓力傳感器傳入生物信號采集處理儀，記錄動脈血壓和脈壓差。分離右頸外靜脈，插入靜脈導(dǎo)管(插入導(dǎo)管長度約15cm左右，相當(dāng)于上腔靜脈入右心房口處) ，壓力信號經(jīng)壓力傳感器傳入生物信號采集處理儀，記錄中心靜脈壓。
(4)在左側(cè)腹股溝部觸及股動脈搏動后，沿動脈走行方向作約4cm長切口，分離出左股動脈和靜脈，分別作股動脈和股靜脈插管，兩插管經(jīng)三通與儲血瓶和輸液瓶相連通，以備放血和輸液。插管操作完畢先從輸液瓶向股靜脈緩慢輸入生理鹽水(5～10滴/分)，保執(zhí)業(yè)獸醫(yī)持靜脈暢通。
(5)在恥骨聯(lián)合上作下腹部正中切口(切口長約5cm)，找到膀胱，排空尿液后，將膀胱從腹腔拉出，在背面膀胱三角區(qū)找到雙側(cè)輸尿管入口，分離雙側(cè)輸尿管并插入輸尿管插管，記錄每分鐘尿滴數(shù)。
(6)在右側(cè)腹直肌旁作約6cm長切口，鈍性分離肌層，打開腹腔后，輕輕拉出一段游離度較大的小腸腸袢，放置在微循環(huán)恒溫灌流盒內(nèi)，使腸系膜置于灌流盒載物臺上，用顯微鏡觀察腸系膜微循環(huán)。
(7)放血前記錄觀察指標(biāo)：觀察記錄血流動力學(xué)指標(biāo)、微循環(huán)指標(biāo)、尿量、呼吸、血氣和酸堿指標(biāo)。
(8)放血復(fù)制失血性休克；
①記錄各項指標(biāo)后，將與股動脈插管相連的三通向儲血瓶開放，降低儲血瓶高度并松開動脈夾，快速放血，在15分鐘內(nèi)使平均動脈壓降至40mmHg。調(diào)節(jié)儲血瓶高度以長期維持血壓在40mmHg。為防止血液凝固，儲血瓶內(nèi)應(yīng)在股動脈插管前加入肝素生理鹽水5mg。
②根據(jù)實驗時間決定維持40mmHg血壓時間的長短，維持時間不應(yīng)少于30分鐘，在此段時間內(nèi)應(yīng)觀察記錄好各項指標(biāo)的變化。
(9)失血性休克救治：
①用動脈夾夾閉股動脈近心端停止放血，三通開關(guān)向輸液瓶開放。將儲血瓶內(nèi)的血液倒入瓶口有雙層過濾紗布的輸液瓶內(nèi)，快速從股靜脈輸回血液及與失血量等量的生理鹽水(250滴/分)。
②輸血輸液后，觀察記錄各項指標(biāo)以及微循環(huán)恢復(fù)狀況。
③用酚妥拉明10mg加入100ml 5％葡萄糖溶液中靜脈滴注，100滴/分。輸注完畢后，觀察記錄各項指標(biāo)以及微循環(huán)變化。
［注意事項］
(1)盡量減少手術(shù)性出血，勿使用手術(shù)刀和剪刀分離血管和肌層。
(2)牽拉腸袢要輕，以免損傷腸系膜影響微循環(huán)觀察或引起低血壓。
(3)壓力傳感器內(nèi)應(yīng)事先充盈肝素生理鹽水并排盡氣泡，安置高度應(yīng)與心房水平一致。
(4)觀察微循環(huán)時，應(yīng)始終固定視野，先選好標(biāo)志血管，分清動脈、靜脈和毛細(xì)血管，畫出觀察視野圖并標(biāo)明動脈、靜脈和毛細(xì)血管。
［思考題］
(1)如果不給失血性休克家犬輸回原血，或者臨床上救治失血性休克病人又暫時得不到血液，你將如何進行救治？請設(shè)計救治方案。
(2)為防止缺血缺氧對組織細(xì)胞損害，還可選擇哪些藥物？
(3)本實驗中是否存在缺血-再灌注損傷？
(孫文清 金海燕)
第三節(jié) 藥物的量效關(guān)系與競爭性拮抗
［實驗?zāi)康模?/p>
（1)觀察應(yīng)用酚妥拉明前后，不同劑量新福林對離體兔主動脈的收縮作用，加深對激動劑、拮抗劑、量效關(guān)系和競爭性拮抗的理解。
（2)了解離體血管實驗方法。
［實驗動物］
家兔（1.8～2.5kg)，性別不拘。
［藥品、器材］
生物信號采集處理儀、張力傳感器、離體血管浴槽裝置一套、超級恒溫水浴器、氧氣鋼瓶、手術(shù)器械一套，培養(yǎng)皿、燒杯、1毫升注射器、萬能支架、克氏液、砝碼等，酚妥拉明：10-5M，新福林10-8M、10-7M、10M-6 、10M-5、10M-4、10M-3、10-2M、。
［觀察指標(biāo)］
用藥前后血管環(huán)張力變化。
［方法、步驟］
（1)準(zhǔn)備好灌流系統(tǒng)，調(diào)節(jié)浴槽水溫于37.4℃，調(diào)節(jié)恒溫浴槽中克氏液為20毫升，標(biāo)記好液面高度，連接并調(diào)好張力傳感器和生物信號采集處理儀。
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（2)取家兔一只，于耳緣靜脈注射空氣處死。迅速打開胸腔，摘除心肺，找到并取出整段胸主動脈(約6厘米)，放入盛有預(yù)先冰冷的充氧克氏液的培養(yǎng)皿中。用克氏液將淤血沖洗干凈，仔細(xì)剝離血管壁結(jié)締組織，然后將血管剪成寬約4毫米的血管環(huán)。用兩個不銹鋼的鉤將血管環(huán)置于浴槽內(nèi)，一端固定于浴槽底部，另一端與傳感器相連(圖8-3)，控制通氧速度為每秒1～2個氣泡。
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圖8-3 離體血管描記裝置
（3)血管環(huán)取靜息張力5克平衡約45分鐘后，走一段基線，從10-8M濃度開始，依次加入濃度按對數(shù)值等距遞增的新福林溶液0.2毫升(稀釋100倍)，至收縮達最大值(增加劑量不再使收縮加強)為止。換入新鮮克氏液沖洗3～4次，重新平衡約20分鐘，使血管張力恢復(fù)到基線位置。預(yù)先加入酚妥拉明10-5M(終濃度)0．2毫升。然后重復(fù)上述給藥步聚，觀察收縮幅度的變化。
（4)實驗完畢，打印記錄結(jié)果，測量每次加新福林后收縮曲線高度，換算為收縮力，以克表示。
將結(jié)果填入下表：
表8-1 不同濃度新福林引起血管環(huán)收縮幅度(克)
| 10-8 | 10-7 | 10-6 | 10-5 | 10-4 | 10-3 | 10-2 | |
| 用酚妥拉明前 用酚妥拉明后 |
（5)以血管環(huán)收縮幅度為縱坐標(biāo)，藥物對數(shù)濃度為橫坐標(biāo)，將應(yīng)用酚妥拉明前后新福林引起血管環(huán)收縮的兩條量效曲線繪入同一坐標(biāo)紙上。
［注意事項］
1．制備血管環(huán)時，不要用鑷子用力夾，不要過分牽拉，以免損傷血管內(nèi)皮。
2．浴槽內(nèi)的的溫度控制必須在37.0土2℃，氧氣供給量不宜過大。
3．平衡要好，整個操作期間不能有振動，否則需重新平衡15分鐘以上。
4．本實驗屬于定量觀察，每次所加液量、藥量必須準(zhǔn)確。
［思考題］
（1)什么是激動劑?什么是拮抗劑?
（2)何謂競爭性拮抗?其量效關(guān)系曲線將如何改變?
（廖端芳 謝志忠)
