2)末端分析 其方法較多,這里我們只介紹較常用的幾種。
(1)N-末端測定
A.二硝基氟苯法(FDNB,DNFB):1945年Sanger提出此方法,是他的重要貢獻(xiàn)之一。
DNP-氨基酸用有機(jī)溶劑抽提后,通過層析位置可鑒定它是何種氨基酸。Sanger用此方法測定了胰島素的N末端分別為甘氨酸及苯丙氨酸。醫(yī).學(xué) 全在.線提供www.med126.com
B.氰酸鹽法:1963年Stank及Smyth介紹了一種測定N末端的新方法,步驟如下:
由于乙內(nèi)酰脲氨基酸不帶電荷,因此可用離子交換層析法將它與游離氨基酸分開,分離所得的乙內(nèi)酰脲氨基酸再被鹽酸水解,重新生成游離的氨基酸,鑒別此氨基酸即可了解N-末端是何種氨基酸。
C.二甲基氨基萘磺酰氯法:1956年Hartley等報告了一種測定N-末端的靈敏方法,采用1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯,簡稱丹磺酰氯。它與游離氨基末端作用,方法類似于Sanger的DNFB法,產(chǎn)物是磺酰胺衍生物。
丹磺酰鏈酸具有強(qiáng)烈的黃色熒光。此法優(yōu)點(diǎn)為靈敏性較高(比FDNB法提高100倍,樣品量小于1毫微克分子)及丹磺酰氨基酸穩(wěn)定性較高(對酸水解穩(wěn)定性較DNP氨基酸高),可用紙電泳或聚酰胺薄膜層析鑒定。