第二節(jié) 分子診斷
長期以來，疾病的診斷主要依據(jù)病史、癥狀、體征和各種輔助檢查，如血液學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)乃至物理學(xué)檢查等。然而，上述檢查方法都具有其各自的局限性，使得許多疾病未能被及時準確地診斷，從而延誤了治療良機。因為許多外科疾病在病人出現(xiàn)癥狀、體征及生化改變之前就已存在相當(dāng)一段時間，所以人們一直在盼望能找到一種技術(shù)，在疾病一旦發(fā)生，甚至尚未出現(xiàn)癥狀、體征及生化改變之前，就能作出診斷；對于某些可能的致病因素，包括食品、水質(zhì)、環(huán)境中存在的病原體，人們也期望能有簡單準確的方法及時進行檢測。分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展使人們渴望已久的上述愿望得以實現(xiàn)，這種在分子生物學(xué)理論和技術(shù)發(fā)展基礎(chǔ)上建立起來的一門全新的診斷技術(shù)就是分子診斷。
生物大分子主要指核酸（DNA和RNA)和蛋白質(zhì)，通過從分子水平上完成DNA, RNA或蛋白質(zhì)檢測，從而對疾病作出診斷的方法稱為分子診斷，目前常用的方法有基因診斷和腫瘤標志物檢測兩種。
（一)基因診斷
基因診斷是用分子生物學(xué)的理論和技術(shù)，通過直接探查基因的存在狀態(tài)或缺陷，從基因結(jié)構(gòu)、定位、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄或翻譯水平分析基因的功能，從而對人體狀態(tài)與疾病作出診斷的方法�；蛟\斷檢測的目標分子是DNA或RNA，反映基因的結(jié)構(gòu)和功能。檢測的基因有內(nèi)源性（即機體自身的基因)和外源性（如病毒、細菌等)兩種，前者用于診斷基因有無病變，后者用于診斷有無病原體感染。
基因診斷的意義在于不僅能對某些疾病作出確切診斷，如確定某些遺傳病，也能確定基因與疾病有關(guān)聯(lián)的狀態(tài)，如對疾病的易感性、發(fā)病類型和階段的確定等。就目前已經(jīng)開展的工作而言，外科領(lǐng)域的遺傳性疾病、遺傳易感性疾病、多種惡性腫瘤、感染性疾病、器官移植反應(yīng)等都可以用基因診斷的方法加以診斷。
基因診斷的主要技術(shù)有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)和生物芯片技術(shù)。
1．核酸分子雜交技術(shù)
（1)原理
具有一定互補序列和核昔酸單鏈在液相或固相中按堿基互補配對原則締合成異質(zhì)雙鏈的過程，稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測核酸序列和探針序列。應(yīng)用該技術(shù)可對特定DNA或RNA序列進行定性或定量檢測。
（2)基因探針及其標記
基因探針是一段與待測DNA或RNA互補的核昔酸序列，可以是DNA或RNA，長度不一，可為完整基因，也可為其中一部分。根據(jù)探針的來源和性質(zhì)分為基因組DNA探針、cDNA探針、RNA探針和人工合成的寡核昔酸探針。作為探針至少必須滿足兩個條件，一是應(yīng)為單鏈（或通過變性形成單鏈)，二是應(yīng)帶有可被示蹤和檢測的標記。有了合適的探針，就有可能檢測出目的基因，觀察有無突變，也可根據(jù)探針的結(jié)合量進行定量檢測。選擇探針最基本的原則是要有高度特異性，其次也需考慮到制備探針的難易性和檢測手段的靈敏性等其他因素。
（3)常用核酸分子雜交技術(shù)
①Southern印跡雜交；②Northern印跡雜交；③斑點雜交（ dotblotting)；④原位雜交（in situ hybridization)；⑤夾心雜交（三明治雜交)；⑥液相雜交。
