70年代后,以基因工程技術(shù)的出現(xiàn)作為新的里程碑,標(biāo)志著人類涂認(rèn)識生命本質(zhì)并能主動改造生命的新時期開始。其間的重大成就包括:
1 重組DNA技術(shù)的建立和發(fā)展
分子生物學(xué)理論和技術(shù)發(fā)展的積累使得基因工程技術(shù)的出現(xiàn)成為必然。1967-1970年R.Yuan和H.O.Smith等發(fā)現(xiàn)的限制性核酸內(nèi)切酶為基因工程提供了有力的工具;1972年Bery等將SV-40病毒DNA與噬菌體P22DNA在體外重組成功,轉(zhuǎn)化大腸桿菌gydjdsj.org.cn,使本來在真核功能中合成的蛋白質(zhì)能在細(xì)菌中合成,打破了種屬界限;1977年Boyer等首先將人工合成的生長激素釋放抑制因子14肽的基因重組入質(zhì)粒,成功地在大腸桿菌中合成得到這14肽;1978年Itakura(板倉)等使人生長激素191肽在大腸桿菌中表達(dá)成功;1979年美國基因技術(shù)公司用人工合成的人胰島素基因重組轉(zhuǎn)入大腸桿菌中合成人胰島素。至今我國已有人干擾素、人白介素2、人集落刺激因子、重組人乙型肝炎病毒為疫苗、基因工程幼畜腹瀉疫苗等多種基因工程藥物和疫苗進(jìn)入生產(chǎn)或臨床試用,世界上還有幾百種基因工程藥物及其它基因工程產(chǎn)品在研制中,成為當(dāng)今農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥業(yè)發(fā)展的重要方向,將對醫(yī)學(xué)和工農(nóng)業(yè)發(fā)展作出新貢獻(xiàn)。
轉(zhuǎn)基因動植物和基因剔除植物的成功是基因工程技術(shù)發(fā)展的結(jié)果。1982年P(guān)almiter等將克隆的生長激素基因?qū)胄∈笫芫鸭?xì)胞核內(nèi),培育得到比原小鼠個體大幾倍的”巨鼠“,激起了人們創(chuàng)造優(yōu)良品家畜的熱情。我國水生生物研究所將生長激素基因轉(zhuǎn)入魚受精卵,得到的轉(zhuǎn)基因魚的生長顯著加快、個體增大;轉(zhuǎn)基因豬也正在研制中。用轉(zhuǎn)基因動物還能獲取治療人類疾病的重要蛋白質(zhì),導(dǎo)入了凝血因子IX基因的轉(zhuǎn)基因綿羊分泌的乳汁中含有豐富的凝血因子IX,能有效地用于血友病的治療。在轉(zhuǎn)基因植物方面,1994年能比普通西紅柿保鮮時間更長的轉(zhuǎn)基因西紅柿投放市場。1996年轉(zhuǎn)基因玉米、轉(zhuǎn)基因大豆相繼投入商品生產(chǎn),美國最早研制得到抗蟲棉花,我國科學(xué)家將自己發(fā)現(xiàn)的蛋白酶抑制劑基因轉(zhuǎn)入棉花獲得抗棉鈴蟲的棉花株。到1996年全世界已有25萬公頃土地種植轉(zhuǎn)基因植物。
基因診斷與基因治療是基因工程在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)展的一個重要方面。1991年美國向一患先天性免疫缺陷病(遺傳性腺苷脫氨酶ADA基因缺陷)的女孩體內(nèi)導(dǎo)入重組的ADA基因。獲得成功。我國也在1994年用導(dǎo)入人凝血因子IX基因的方法成功治療了乙型血友病的患者。在我國用作基因診斷的試劑盒已有近百種之多。基因診斷和基因治療正在發(fā)展之中。
這時期基因工程的迅速進(jìn)步得益于許多分子生物學(xué)新技術(shù)的不斷涌現(xiàn)。包括:核酸的化學(xué)合成從手工發(fā)展到全自動合成。1975-1977年Sanger、Maxam和Gilbert先后發(fā)明了三種DNA序列的快速測定法;90年代全自動核酸序列測定儀的問世;1985年Cetus公司Mullis等發(fā)明的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的特定核酸序列擴(kuò)增技術(shù),更以其高靈敏度和特異性被廣泛應(yīng)用、對分子生物學(xué)的發(fā)展起到重大的推動作用。