2017年執(zhí)業(yè)藥師《中藥化學(xué)》考試復(fù)習(xí)講義：第3章

2017年執(zhí)業(yè)中藥師中藥化學(xué)章節(jié)考點（4)

第三章　糖和苷

　　第四節(jié)　提取分離方法

　　在提取分離方法里苷類化合物是有苷和苷元的區(qū)分，苷類化合物和苷元它們是一對母子關(guān)系，苷在適當(dāng)?shù)臈l件下能轉(zhuǎn)變?yōu)檐赵�。苷是一個親水性的成分，苷元是一個親脂性的成分苷的親水性的大小取決于苷元部分，以及在形成苷的時候所連的糖這樣兩個部分。

　　苷在植物體里邊的存在狀況有原生苷和次生苷的區(qū)分，在提取分離苷類化合物時，有時候需要提取的是原生苷，有時候需要提取的是次生苷，有的時候又需要提取的是苷元。

　　在提取原生苷的時，首先要盡量設(shè)法破壞或抑制酶的活性，以避免原生被酶解，常用的方法是采用甲醇、乙醇或沸水提取，或者在藥材原料中拌入一定量的無機鹽(如碳酸鈣)。其次是在提取過程中要注意避免與酸或堿接觸，以防酸或堿破壞欲提取成分的結(jié)構(gòu)。

　　提取次生苷時要利用酶的活性。

　　采用溶劑萃取法分離時，一般可用乙醚或氯仿萃取得到苷元，用醋酸乙酯萃取得到單糖苷，用正丁醇萃取得到多糖苷。

　　練習(xí)題

　　X型題

　　從中藥里提取原生苷可采用的方法有(　)

　　A.水浸泡法

　　B.沸水煮沸法

　　C.乙醇提取法

　　D.乙醚提取法

　　E.酸水提取法

　　『正確答案』BC

　　A型題

　　要從含苷類中藥中得到較多的有生物活性的游離的苷原，最好的方法是(　)

　　A.用乙醇提取，回收乙醇，加酸水解以后用乙醚來萃取

　　B.用乙醚直接來萃取

　　C.用水提取，提取液加酸水解以后萃取

　　D.用水提取，提取液直接用乙醚來萃取

　　E.用乙醇提取，回收乙醇以后，用乙醚來萃取

　　『正確答案』A

　　第五節(jié)　結(jié)構(gòu)測定

　　苷是由糖和苷元兩部分組成的。

　　苷的分解，首先了解基本的分子量的大小，就把苷通過水解的辦法變成兩部分，變成苷元部分、糖部分，然后分別對苷元部分、糖部分分別來進行結(jié)構(gòu)研究，最后將兩部分結(jié)構(gòu)，拼揍在一起醫(yī)學(xué)全.在.線.提供. www.gydjdsj.org.cn，還原成一個苷的完整的結(jié)構(gòu)。

　　一、糖的鑒定

　　(一)紙色譜

　　展開劑以正丁醇-乙醇-水和水飽和的苯酚兩種系統(tǒng)應(yīng)用最為普遍。正丁醇醋酸水簡稱BAW系統(tǒng)，B代表正丁醇，A代表醋酸，W代表水。比例為4:1:5的上層溶液。糖類的紙色譜常用顯色劑有：硝酸銀試劑;三苯四氮唑鹽試劑;苯胺-鄰苯二甲酸鹽試劑;3,5-二羥基甲苯-鹽酸試劑;過碘酸加聯(lián)苯胺試劑等。

　　在用紙層吸來進行分離，最常見的糖是葡萄糖和鼠李糖，這兩個糖Rf值的大小一般的規(guī)律是，鼠李糖因為極性，小于葡萄糖，在用紙色譜檢識時，鼠李糖的Rf值一般大于葡萄糖。不同的糖Rf值的大小都會有比較大的差別。

　　常用顯色劑有：硝酸銀試劑，使還原糖顯棕黑色;三苯四氮唑鹽試劑，使單糖和還原性低聚糖呈紅色;苯胺-鄰苯二甲酸鹽試劑，使單糖中的五碳糖和六碳糖所呈顏色略有區(qū)別;3，5-二羥基甲苯-鹽酸試劑，使酮糖和含酮糖的低聚糖呈紅色;過碘酸加聯(lián)苯胺，使糖、苷和多元醇中有鄰羥基結(jié)構(gòu)者呈藍底白邊。

　　(二)薄層色譜

　　糖的極性大，在硅膠薄層上進行層析時，點樣量不宜過多。若點樣太多，斑點就會明顯拖尾，Rf值也下降，使一些Rf值相近的糖難以獲得滿意的分離。若硅膠用0.03mol/L硼酸溶液或一些無機鹽的水溶液代替水調(diào)制吸附劑涂鋪薄層，則樣品承載量可明顯增加，分離效果也有改善。

　　(三)氣相色譜

　　(四)離子交換色譜

　　(五)液相色譜

　　二、糖鏈的結(jié)構(gòu)測定

　　測定糖鏈的結(jié)構(gòu)主要解決三個問題：單糖的組成;糖與糖的連接位置和順序;苷鍵的構(gòu)型。

　　(一)分子量的測定　苷的分子量測定目前大多采用質(zhì)譜法。但由于其極性大導(dǎo)致熱揮發(fā)性差，電子轟擊法(EI)和化學(xué)電離(CI)常不能得到理想的結(jié)果，一般采用場解吸(FD)、快原子轟擊(FAB)、電噴霧(ESI)等方法獲得[M+H]+、[M+Na]+等準分子離子峰。

　　(二)單糖的鑒定　苷中糖鏈的研究首先要了解由哪些單糖所組成，各種單糖之間的比例如何。一般是將苷鍵全部酸水解，然后用紙色譜檢出單糖的種類。經(jīng)顯色后用薄層掃描儀求得各種糖的分子比。單糖的定性定量也可以通過苷全甲基化并水解后得到的甲基化單糖的氣相色譜決定，但需要各種各樣的甲基化單糖作標準品。

　　(三)單糖之間連接位置的確定

　　單糖之間連接位置的確定的兩種方法是：苷全甲基化甲醇解，13CNMR苷化位移。

　　將苷全甲基化，然后水解苷鍵，鑒定所有獲得的甲基化單糖，其中游離的一OH的部位就是連接位置。水解要盡可能溫和，否則會發(fā)生去甲基化反應(yīng)和降解反應(yīng)。

　　(四)糖鏈連接順序的確定

　　早期決定糖連接順序的方法主要是緩和水解法，即用稀酸(包括有機酸)水解、酶解、乙酰解、堿水解等方法，將苷的糖鏈水解成較小的片段(各種低聚糖)，然后分析這些低聚糖的連接順序，從低聚糖的結(jié)構(gòu)推測整個糖鏈的結(jié)構(gòu)。Smith裂解法也廣泛用于糖連接順序的決定，只是分析碎片的工作比較繁瑣。

　　近年質(zhì)譜分析也已用于糖鏈連接順序的研究。在快原子轟擊質(zhì)譜(FABMS)中有時會出現(xiàn)苷分子中依次脫去末端糖的碎片離子峰。如果單糖的質(zhì)量不同，可由此確定糖的連接順序。

　　目前，2D-NMR和NOE差譜技術(shù)在確定糖鏈連接位置和順序的研究中有了廣泛的應(yīng)用。如在以下化合物HMBC譜中可以觀察到1″-H和7-C，1′″-H和3″-C以及l(fā)″″-H和6″′-C的遠程相關(guān)，由此可判斷糖與苷元及單糖之間的連接順序。

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