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生物檢定統(tǒng)計法
一、總則
生物檢定法是利用藥物對生物體或其離體器官組織等所起的藥理作用來檢定藥物效價的方法，用于無適當理化方法進行檢定的藥物。
生物檢定統(tǒng)計法主要敘述應用生物檢定時必須注意的基本原則、一般要求、實驗設計及統(tǒng)計方法。有關品種用生物檢定的具體實驗條件和要求，必須按照該品種生物檢定法項下的規(guī)定。
生物檢定標準品 凡中國藥典規(guī)定用生物檢定的品種都有它的生物檢定標準品(S)。(S)都有標示效價，以效價單位(u)表示，其含義和相應的國際標準品的效價單位一致。
供試品
供試品（T）或（U）是供檢定其效價的樣品，它的活性組分應與標準品基本相同。
A<[T]>或A<[u]>是（T）或（U）的標示量或估計效價。
等反應劑量對比
生物檢定是將（T）和其（S）在相同的實驗條件下同時對生物體或其離體器官組織等的作用進行比較，通過對比，計算出它們的等反應劑量比值(R),以測得（T）的效價P<[T]>。
R是（S）和（T）等反應劑量（ds、dT）的比值，即R＝ds／dT。
M是（S）和（T）的對數(shù)等反應劑量（xs、xT）之差，即
M＝logds－logdT＝xs－xT。R＝antilogM。
P<[T]>是通過檢定測得（T）的效價含量,稱（T）的測得效價；是將效價比值(R)用(T)的標示量或估計效價A<[T] >校正之后而得。即P<[T]>=A<[T]>·R或P<[T]>＝A<[T]> ·antilogM。
檢定時，（S）按標示效價計算劑量,（T）按標示量或估計效價(A<[T]>)計算劑量,注意調(diào)節(jié)（T）的劑量或調(diào)整其標示量或估計效價,使(S)和(T)的相應劑量組所致的反應程度相近。
生物變異的控制
生物檢定具有一定的實驗誤差，其主要來源是生物變異性。因此生物檢定必須注意控制生物變異，或減少生物變異本身，或用適宜的實驗設計來減小生物變異對實驗結(jié)果的影響，以減小實驗誤差�？刂粕镒儺惐仨氉⒁庖韵聨c。
(1) 生物來源、飼養(yǎng)或培養(yǎng)條件必須均一。
(2) 對影響實驗誤差的條件和因子，在實驗設計時應盡可能作為因級限制，將選取的因級隨機分配至各組。例如體重、性別、窩別、雙碟和給藥次序等都是因子，不同體重是體重因子的級，雌性雄性是性別因子的級，不同窩的動物是窩別因子的級，不同雙碟是碟間因子的級，給藥先后是次序因子的級等。按程度劃分的級（如動物體重），在選級時，應選動物較多的鄰近幾級，不要間隔跳越選級。
(3) 按實驗設計類型的要求將限制的因級分組時，也必須嚴格遵守隨機的原則。
誤差項
指從實驗結(jié)果的總變異中分去不同劑量及不同因級對變異的影響后，剩余的變異成分，用方差(S<2>)表示。對于因?qū)嶒炘O計類型的限制無法分離的變異成分，或估計某種因級對變異的影響小，可不予分離者，都并入S<2>。但劑間變異必須分離。
誤差項的大小影響標準誤S<[M]>和可信限（FL）。
不同的檢定方法和實驗設計類型，分別按有關的公式計算S<[2]>。
可靠性測驗
平行線檢定要求在實驗所用的劑量范圍內(nèi)，對數(shù)劑量的反應（或反應的函數(shù)）呈直線關系，供試品和標準品的直線應平行�？煽啃詼y驗即驗證供試品和標準品的對數(shù)劑量反應關系是否顯著偏離平行偏離直線，對不是顯著偏離平行偏離直線（在一定的概率水平下）的實驗結(jié)果，認為可靠性成立，方可按有關公式計算供試品的效價和可信限。
可信限可信限（FL）標志檢定結(jié)果的精密度。M的可信限是M的標準誤S<[M]>和t值的乘積（t·S<[M]>），用95％的概率水平。M＋t·S<[M]>是可信限的高限；M－t·S<[M]>是可信限的低限。用其反對數(shù)計算得R和P<[T]> 的可信限低限及高限，是在95％的概率水平下從樣品的檢定結(jié)果估計其真實結(jié)果的所在范圍。
R或P<[T]>的可信限率（FL％）是用R或P<[T]>的可信限計算而得。
計算可信限的t值是根據(jù)S<2>的自由度（f）查t值表而得。
t值與f的關系見表一。
表一 t值表（P＝0.95）
────┬───┬───┬───┬───┬───┬───┬────
f │ t │ f │ t │ f │ t │ f │ t
────┼───┼───┼───┼───┼───┼───┼────
3 │ 3.18 │ 8 │ 2.31 │ 14 │ 2.15 │ 30 │ 2.04
4 │ 2.78 │ 9 │ 2.26 │ 16 │ 2.12 │ 40 │ 2.02
5 │ 2.57 │ 10 │ 2.23 │ 18 │ 2.10 │ 60 │ 2.00
6 │ 2.45 │ 11 │ 2.20 │ 20 │ 2.09 │ 120 │ 1.98
7 │ 2.37 │ 12 │ 2.18 │ 25 │ 2.06 │ ∞ │ 1.96
────┴───┴───┴───┴───┴───┴───┴────
各品種的檢定方法項下都有其可信限率的規(guī)定,如果檢定結(jié)果不符合規(guī)定,可縮小動物體重范圍或年齡范圍，或調(diào)整對供試品的估計效價或調(diào)節(jié)劑量，重復實驗以減小可信限率。
對同批供試品重復試驗所得n次實驗結(jié)果(包括FL％超過規(guī)定的結(jié)果)，可按實驗結(jié)果的合并計算法算得P<[T]>的均值及其FL％作為檢定結(jié)果。
二、直接測定法
直接測得藥物對各個動物最小效量或最小致死量的檢定方法。如洋地黃及其制劑的效價測定。
xs和xT為S和T組各只動物的對數(shù)最小致死量， 它們的均值Ｙs和ＹT為S和T的等反應劑量，n<[s]>和nT為S和T組的動物數(shù)。
�。ㄗⅲ河捎谟嬎銠C內(nèi)無均值符號，故用Ｙs和ＹT代替。
1.效價計算
按(1)～(3)式計算M、R和P<[T]>。
M＝Ｙs －ＹT
(1)
R＝antilog（Ｙs-ＹT）＝antilog M
(2)
P<[T]>＝A<[T]>·R
(3)
2.誤差項及可信限計算
按(4)～(8)式計算S<2>、S<[M]>及R或P<[T]>的FL和FL％。
∑(Xs)<2> （∑XT）<2>
∑(Xs)<2>－ ───── ＋∑(XT)<2>－ ─────
ns nT
S<2> ＝────────────────────────── (4)
ns＋nT－2
f＝ns＋nT－2
用此自由度查表一得t值
┌─────────────
│ ns＋nT
S<[M]>＝ │ S<2> ·──────
√ ns·nT
R的FL＝antilog(M±t·S<[M]>)
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