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5.其他甾體
①薄層色譜法②高效液相色譜法
含量測定
1.高效液相色譜法2.紫外分光光度法3.四氮唑比色法
四氮唑鹽的種類：①2,3,4-三苯基氯化四氮唑（TTC），也稱紅四氮唑（RT），其還原產(chǎn)物為不溶于水的深紅色三苯甲zan
②藍(lán)四氮唑（BT）,即3,3’-二甲氧苯基-雙-4,4’-(3,5-二苯基)氯化四氮唑，其還原產(chǎn)物為暗藍(lán)色的雙甲zan
反應(yīng)原理：皮質(zhì)激素C17-α-醇酮基（-CO-CH2OH）具有還原性，在強堿性試液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲zan。生成顏色隨所用試劑和條件的不同而定，多為紅色或藍(lán)色。
測定方法：中國藥典采用氯化三苯四氮唑法。
例如醋酸潑尼松龍軟膏的含量測定。
討論：
①基團(tuán)影響：C11-酮基的反應(yīng)速度快于C11-羥基甾體；C21-羥基酯化后較其母體羥基的反應(yīng)速度慢；當(dāng)酯化了的基團(tuán)為三甲基醋酸酯、磷酸酯或琥珀酸酯時，反應(yīng)更慢。
②溶劑和水分的影響：含水量大時會使呈色速度減慢，但含水量不超過5%時，對結(jié)果幾無影響，因此可采用95%乙醇。
③堿的種類及加入順序的影響：在各類堿中，采用氫氧化四甲基銨能得到滿意結(jié)果，故最為常用。以先加四氮唑鹽溶液再加堿液較好。
④空氣中氧及光線的影響：反應(yīng)及其產(chǎn)物對光敏感，故應(yīng)避光。
⑤溫度與時間的影響：一般室溫或30℃恒溫條件下顯色。中國藥典多數(shù)25℃暗處反應(yīng)40～45min。
4.異煙肼比色法
甾體激素C3-酮基及某些其他位置上的酮基都能在酸性條件下與羰基試劑異煙肼縮合形成黃色異煙腙，在一定波長下具有最大吸收。
某些具有兩個酮基的甾體激素可形成雙腙，如黃體酮、可的松和氫化可的松等。
本法主要用于甾體激素制劑的測定，如倍他米松軟膏、哈西奈德軟膏、倍他米松磷酸鈉及其注射液等的含量測定。
討論：①溶劑的選擇：只用用無水乙醇和無水甲醇才能得到滿意的結(jié)果，其他溶劑因受到異煙肼鹽酸鹽在其中溶解度的限制不能采用。
②酸的種類和濃度以及異煙肼的濃度：當(dāng)酸與異煙肼試劑的摩爾比為2：1時可獲得最大吸收度。
③水分、溫度、光線和氧的影響：當(dāng)溶劑中含水量增高，吸收度隨之降低。溫度升高，反應(yīng)加速。當(dāng)在具塞玻管中不致使溶劑揮發(fā)及吸收水分的情況下，光與氧不影響反應(yīng)。
④關(guān)于反應(yīng)的專屬性：具有Δ4-3-酮基的甾體激素在室溫不到1h即可定量地與酸性異煙肼反應(yīng)。其他甾酮化合物需在長時間放置或加熱后方可反應(yīng)完全，因此在上述反應(yīng)條件下，本法對Δ4-3-酮甾體具有一定的專屬性。
5.Kober反應(yīng)比色法
Kober反應(yīng)是指雌激素與硫酸-乙醇共熱呈色，用水或稀硫酸稀釋后重新加熱發(fā)生顏色改變，并在515nm附近有最大吸收。
Kober反應(yīng)有兩步：①與硫酸-乙醇光熱產(chǎn)生黃色，在465nm處有最大吸收；②加水或稀硫酸稀釋，重新加熱顯桃紅色，在515nm處有最大吸收。
中國藥典采用本法測定炔雌醇片及復(fù)方炔諾孕酮片、復(fù)方炔諾孕酮滴丸、復(fù)方左炔諾孕酮滴丸中的炔雌醇的含量。
維生素類藥物
維生素A
維生素A的結(jié)構(gòu)為具有一個共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯，因而具有許多立體異構(gòu)體。
天然維生素A主要是全反式維生素A。
性質(zhì)：具紫外吸收，易氧化變質(zhì)，能與三氯化銻呈色，與氯仿、乙醚、環(huán)己烷或是由醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。
鑒別試驗
①三氯化銻反應(yīng)（Carr-price反應(yīng)）：維生素A在飽和無水三氯化銻的無醇氯仿溶液中，即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。醫(yī)學(xué).全.在.線網(wǎng)站gydjdsj.org.cn
②紫外吸收光譜：維生素A分子中含有5個共軛雙鍵，其無水乙醇溶液在波長326nm處有最大吸收。當(dāng)在演算催化下加熱，則發(fā)生去水反應(yīng)而生成脫水維生素A。后者比維生素A多一個共軛雙鍵，使其最大吸收峰紅移，同時在350～390nm波長范圍內(nèi)出現(xiàn)3個最大吸收峰。
③薄層色譜：以硅膠G為吸附劑，環(huán)己烷-乙醚（80：20）為流動相。
含量測定：紫外分光光度法（三點校正法）
原理：本法是在三個波長處測定吸收度，根據(jù)校正公式計算吸收度A校正值后，再計算含量，故本法亦稱“三點校正法”。原理如下：
①雜質(zhì)的吸收在310～340nm波長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大，吸收度變小。
②物質(zhì)對光的吸收具有加和性。
三點波長的選擇法
①第1點：選擇維生素A的最大吸收波長（即λ1）。
②第2點和第3點：在最大吸收波長的兩側(cè)各選一點（即λ2和λ3）。
等波長差法：在λ1的左右各選一點為λ2和λ3,使λ3—λ1＝λ1—λ2。維生素A醋酸酯。
等吸收法：在λ1的左右各選一點為λ2和λ3,使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1。維生素A醇。
③雜質(zhì)吸收：對維生素A的測定有影響的雜質(zhì)主要有：
維生素A2和維生素A3；維生素A的氧化產(chǎn)物（環(huán)氧化物、維生素A醛和維生素A酸）；維生素A在光照下產(chǎn)生的無生物活性的聚合物鯨醇；維生素A
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