|
一、鑒別試驗(yàn)
鑒別就是利用化學(xué)法、物理法及生物學(xué)方法來確證生化藥物的真?zhèn)巍Ｍǔ�，需用�?biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吩谕粭l件下進(jìn)行對照試驗(yàn)�，F(xiàn)將常用的鑒別方法簡述如下。
1.化學(xué)反應(yīng)法 通常利用藥物與某試劑在一定條件下反應(yīng)，生成有顏色的產(chǎn)物或沉淀進(jìn)行鑒別。例如，溶菌酶的鑒別采用呈色法：溶菌酶分子中的四個(gè)肽鍵上的氮原子能與銅離子（Cu2＋）絡(luò)合，生成有顏色的絡(luò)合物，肽鍵越多，產(chǎn)生的顏色越深。胃蛋白酶的鑒別采用沉淀法：胃蛋白酶是具有高效、專一催化活性的特殊蛋白質(zhì)，易受酸、堿、重金屬或有機(jī)溶劑等的作用，破壞蛋白質(zhì)肽鏈的空間結(jié)構(gòu)，引起蛋白質(zhì)變性，生成不溶性的沉淀。
2.紫外分光光度法 三磷酸腺苷二鈉的分子中具有共軛系統(tǒng)，能吸收紫外光。本品的0.01mol／L鹽酸水溶液（20μg／ml），在（257±1）nm的波長處有最大吸收。A250nm／A260nm的值應(yīng)為0.17～0.27。
3．酶法 尿激酶是專屬性較強(qiáng)的蛋白水解酶，根據(jù)尿激酶能激活牛纖維蛋白溶酶原，而具有相同作用的鏈激酶不能激活牛纖維蛋白溶酶原而加以區(qū)別，并用直接觀察溶解纖維蛋白作用的氣泡上升法作為判斷指標(biāo)。
4.電泳法 肝素的鑒別采用糖凝膠電泳法：肝素是由D-硫酸氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子間組成的酸性粘多糖，其水溶液帶強(qiáng)負(fù)電荷，于瓊脂凝膠板上，在電場作用下，向正極方向移動，與肝素國家標(biāo)準(zhǔn)品對照，其移動位置應(yīng)相應(yīng)，
5. 生物法利用生物體進(jìn)行試驗(yàn)來鑒別藥物。例如，用家兔驚厥試驗(yàn)來鑒別胰島素，是通過胰島素的降血糖作用進(jìn)行鑒別的，當(dāng)劑量過大，血糖降低至一定水平（約30％），家兔即發(fā)生驚厥，迅速靜注50％葡萄糖注射液，補(bǔ)充血糖，驚厥停止，說明驚厥是胰島素所致低血糖而引起的。又如，根據(jù)肝素鈣具有延長血凝時(shí)間的特性進(jìn)行鑒別。
應(yīng)該指出，由于生化藥物的結(jié)構(gòu)復(fù)雜，仍有一部分生化藥物目前還未找到有效的鑒別方法。例如糜蛋白酶、糜胰蛋白酶、胰蛋白酶等。
二、雜質(zhì)檢查 生化藥物分子較大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，有時(shí)成分并非單一，純化工藝較難，因此，生化藥物的雜質(zhì)檢查就顯得非常重要。 醫(yī)學(xué)全在線網(wǎng)站gydjdsj.org.cn
1．一般雜質(zhì)檢查 生化藥物的一般雜質(zhì)檢查項(xiàng)目包括氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重金屬、酸度、溶液的澄清度或溶液的顏色、水分及干燥失重、熾灼殘?jiān)�。其檢查的原理及方法與化學(xué)藥物中的一般雜質(zhì)檢查相同，不再贅述。
2．特殊雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)主要是指從生產(chǎn)工藝中引入或原料中帶入的雜質(zhì)。許多生化藥物是從生物組織中提取或用微生物發(fā)酵法制得，藥物中易殘存一些雜質(zhì)或其他成分。例如，胰蛋白酶是從動物膜中提取制得的一種蛋白水解酶，在制備過程中．易帶入雜質(zhì)糜蛋白酶，中國藥典（1995年版）和USP（23）均規(guī)定要檢查此酶，根據(jù)胰蛋白酶的特性選用N-乙酰-L-酪氨酸乙酯為底物作糜蛋白酶的限度檢查。糜蛋白酶的限度為2500個(gè)胰蛋白酶單位中不得大于50單位，按每1mg胰蛋白酶為 2500個(gè)單位和每1mg糜蛋白酶為1000單位，折算成重量，則糜蛋白酶的限度為5％（g／g）。
三、安全性檢查
1.熱原檢查法（家兔法） 本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，以其體溫升高的程度，判定該供試品中所含熱原是否符合規(guī)定，是一種限度試驗(yàn)法。
（1）檢查法：取適用的家兔3只，測定其正常體溫后15min以內(nèi)，自耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s38℃的供試品溶液，然后每隔1h按前法測量其體溫1次，共測3次，從3次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高度數(shù)。如3只家兔中有1只體溫升高0.6℃或以上，或3只家兔體溫升高均低于 0.6℃，但升高的總數(shù)達(dá)1.4℃或1.4℃以上，應(yīng)另取5只家兔復(fù)試，檢查方法同上。
（2）結(jié)果判斷：在初試3只家兔中，體溫升高均低于0.6℃，并且3只家兔體溫升高總數(shù)低于1.4℃；或在復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃ 以上的家兔數(shù)僅有1只，并且初試、復(fù)試合并8只家兔的體溫升高總數(shù)為3.5℃或3.5℃以下，均認(rèn)為供試品的熱原檢查符合規(guī)定。
2. 異常毒性試驗(yàn)異常毒性試驗(yàn)是用一定劑量的藥物按指定的操作方法和給藥途徑給予規(guī)定體重的某種試驗(yàn)動物，觀察其急性毒性反應(yīng)。反應(yīng)的判斷以試驗(yàn)動物死亡與否為終點(diǎn)。中國藥典規(guī)定的異常毒性試驗(yàn)，實(shí)際上是一個(gè)限度試驗(yàn)。在此劑量條件下，一般供試品不應(yīng)使試驗(yàn)動物中毒致死；如果出現(xiàn)試驗(yàn)動物急性中毒而死亡，則反映該供試品中含有的急性毒性物質(zhì)超過了正常水平，因此，本試驗(yàn)又稱異常毒性檢查法。在出現(xiàn)試驗(yàn)動物死亡時(shí)，除動物試驗(yàn)方法存在的差異或偶然差錯(cuò)外，主要決定于供試品在生產(chǎn)過程中是否帶入可引發(fā)異常毒性反應(yīng)的雜質(zhì)。異常毒性試驗(yàn)的動物為小白鼠。試驗(yàn)操作方法有尾靜脈注射法、皮下注射法、腹腔注射法及口服給藥法等。
中國藥典（1995年版）中規(guī)定了50多種藥物需做異常毒性檢查。例如，玻璃酸酶的異常毒性檢查方法如下：
取體重17～22g的健康小白鼠5只，分別由皮下注射每lml中含玻璃酸酶10000單位的氯化鈉注射液0.25時(shí)，48hr內(nèi)不得發(fā)生皮下組織壞死或死亡，如有一只小白鼠發(fā)生組織壞死或死亡，應(yīng)按上述方法復(fù)試，全部小白鼠在48h內(nèi)不得有組織壞死或死亡現(xiàn)象。
[1] [2] 下一頁
... |
