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藥物分析
第一章 藥物分析的任務與發(fā)展
藥物分析是一門研究藥品及其制劑的組成、理化性質、真?zhèn)舞b別、純度檢查及其有效成分的含量測定等的一門學科。目的是保證人們用藥安全、合理、有效。
藥品用于防病、治病、診斷疾病、改善體質、增強機體抵抗力的物質。
藥典是一個國家關于藥品標準的法典，是國家管理藥品生產與質量的依據。
第2章 藥物分析的基礎知識
第一節(jié) 藥品檢驗工作的基本程序
一般為取樣、鑒別、檢查、含量測定、寫出報告。
取樣：
鑒別：判斷真?zhèn)巍?nbsp; 檢查：稱純度檢查，判定藥物優(yōu)劣。 含量測定：測定藥物中有效成分的含量。
檢驗報告必須明確、肯定、有依據。
計量儀器認證要求：縣級以上人民政府計量行政部門負責進行監(jiān)督檢查。符合經濟合理、就地就近。第二節(jié) 藥品質量標準分析方法驗證
目的是證明采用的方法適合于相應的檢測要求。
驗證內容：準確度、精密度(包括重復性、中間精密度和重現性)、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。
一、準確度： 是指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，一般以百分回收率表示。
至少用9次測定結果進行評價。
二、精密度： 是指在規(guī)定的條件下，同一個均勻樣品，經過多次取樣測定所得結果之間的接近程度。
用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。
1、 重復2、 性：相同3、 條件下，4、 一個分析人員測定所得結果的精密度稱為重復5、 性。至少9次。
6、 中間精密度：同7、 一個實驗室，8、 不同9、 時間不同10、 分析人員用不同11、 設備12、 測定結果的精密度。
3、重現性：不同實驗室，不同分析人員測定結果的精密度。分析方法被法定標準采用應進行重現性試驗。
三、專屬性：指在其他成分可能存在的情況下，采用的方法能準確測定出被測物的特性，用于復雜樣品分析時相互干擾的程度。鑒別反應、雜質檢查、含量測定方法，圴應考察專屬性。
四、檢測限：指試樣中被測物能被檢測出的最低量，無須定量。用百分數、ppm或ppb表示。
五、定量限：指樣品中被測物能被定量測定的最低量，測定結果應具一定的精密度和準確度。
六、線性：系指在設計的范圍內，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程度。
七、范圍：能達到一定的精密度、準確度和線性的條件下，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。
八、耐用性：指在一定的測定條件稍有變動時，測定結果不受影響的承受程度。
第三節(jié) 藥物分析的統(tǒng)計學知識
測量誤差：測量值和真實值之差。 絕對誤差和相對誤差。
真實值：是有經驗的人用最可靠的方法對試樣進行多次測定所得的平均值。
系統(tǒng)誤差：(1)方法誤差 (2)試劑誤差 (3)儀器誤差 (4)操作誤差
偶然誤差：不可定誤差或隨機誤差，由偶然原因引起�？稍黾悠降脺y定次數。
測量值的準確度表示測量的正確性，測量值的精密度表示測量的重現性。精密度是表示準確度的先決條件，只有在消除了系統(tǒng)誤差后，才可用精密度同時表達準確度。
提高分析準確度方法：1、選擇合適的分析方法 2、減少測量誤差 3、增加平行測定次數
4、消除測量過程中的系統(tǒng)誤差(校準儀器、做對照試驗、做回收試驗、做空白試驗)
有效數字的處理：0.05060g是四位有效數字。首位是8或9，有效數字可多記一位。PH=8.02是兩位有效數字。四舍六入五成雙原則。修約標準偏差或其他表示不確定度時，修約結果可使準確度估計值變得差一點。S=2.13----2.2 G檢驗法、4d法，>舍去。
第四節(jié) 藥品質量標準制定的原則和基本內容
原則：安全有效，技術先進，經濟合理。 檢驗方法：準確、靈敏、簡便、快速。
(一)、名稱：
(二)、性狀：1、外觀、臭、味和穩(wěn)定性 2、溶解度：一定程度上反映藥品的純度。
3、物理常數
(1)餾程：2000規(guī)定：在標準壓力(101.3kPa)下，按藥典裝置，自開始餾出的第五滴算起，至供試品僅剩3-4ml或一定比例的容積餾出時的溫度范圍。
(2)熔點：系指一種物質固體熔化成液體的溫度，熔融同時分解的溫度，或在熔化時自初熔至全熔的一段溫度。
(3)凝點：系指一種物質由液體凝結為固體時，在短時間內停留不變的最高溫度。
(4)比旋度：具光學異構體分子的藥物，旋光性能不同。按干燥品或無水物計算。準確至0.01 。
(5)折光率：光線自一種透明介質進入另一種透明介質時，兩種介質密度不同，光的進行速度發(fā)生變化，即發(fā)生折射現象，遵從折射定律。對于液體藥品，尤其是植物油，檢查藥品的純雜程度，測定溶液的濃度。
(6)粘度：流體對流動的阻抗能力。共三法，毛細管內徑。
(7)吸收系數：物質對光的選擇性吸收波長。
(三) 鑒別：用理化方法或生物學方法來證明藥品真實性的方法。對已知物。
(四) 雜質檢查：有效性，純度要求和安全性。
1、有效性試驗 2、酸堿度 3、溶液的澄清度與顏色 4、無機陰離子：氯化物和硫酸鹽。
5、有機雜質 6、干燥失重和水分
7、熾灼殘渣：指硫酸化灰分，用于考察有機藥物中混入的無機雜質。一般限度為0.1% 。
8、金屬離子和重金屬檢查 每日劑量0.5g---以上且長期服用的品種。
9、硒和砷：硒檢查有：醋酸地塞米松、醋酸曲安奈德及醋酸氟輕松。第一法：古蔡氏法
10、安全性檢查
(五)含量測定或效價測定： 理化方法稱含量測定 生物學方法或生化方法測定稱效價測定。
1、 容量分析法：化學原料藥含量測定的首選法。
中和法、非水滴定法、銀量法、絡合法、碘量法、重氮化法。
2、 重量法：精密度好準確度高，3、 繁瑣，4、 不5、 能應用容量法時用。揮發(fā)法、萃取法、沉淀法
6、 紫外分光光度法：簡便、快速。原料藥避免。
7、 氣相色譜法：分離效果優(yōu)越，8、 對含雜質和揮發(fā)性的原料藥效好。維生素E
9、 高效液相色譜法：用于多組分抗生素，10、 生化藥品或因雜質干擾測定。常規(guī)方法又難分離藥品。
第三章 藥典知識
中國藥典：凡例(30條)、正文、附錄和索引。
溶解度：極易溶解： < 1ml中溶解 溫度： 水浴溫度： 98---100
易溶： 1 --- 10ml 中溶解 熱水： 70----80
溶解： 10 --- 30ml 中溶解 微溫或溫水 ：40----50
略溶： 30 --- 100ml 中溶解 室溫： 10----30
微溶： 100 ---1000ml 中溶解 冷水： 2-----10
極微溶：1000---10000ml 中溶解 冰�。� 0
幾乎不溶：10000ml 中不能完全溶 放冷：放冷至室溫
液體的滴系指在20 C時，1.0ml水相當于20滴。
粉末粗細： 最粗粉：指能全部通過一號篩，但混有能通過三號篩不超過20%的粉末。
粗粉： 指能全部通過二號篩，但混有能通過四號篩不超過240%的粉末。
中粉： 指能全部通過四號篩，但混有能通過五號篩不超過60%的粉末。
細粉： 指能全部通過五號篩，并含能通過六號篩不少于95%的粉末。
極細粉：指能全部通過六號篩，并含能通過七號篩不少于95%的粉末。
最細粉：指能全部通過八號篩，并含能通過九號篩不少于95%的粉末
陰涼處： 不超過20 C 涼暗處：避光不超過20 C 冷處：2----10 C
稱1.0，指0.06---0.14 。 稱2.0g，指1.5---2.5 g 2.00g 指1.995---2.005g 。
精密稱定：準確至千分之一。 稱定：準確至百分之一。 取用量為“約”： 10%
垣重：連續(xù)兩次差異在0.3mg以下，干燥離第一次1小時后，熾灼離第一次30分后。
第四章 物理常數測定法
一、熔點：第一法：測定易粉碎固體藥品：先干燥，熔點135 C以上，105 C干燥，135 C以下，五氧化二磷干燥器。裝入供試品高度3mm，距2.5mm。升溫速度每分鐘1---1.5 C。
第二法：測定不易粉碎固體藥品：先熔融，兩端開口吸入 ，高度10mm ，放置24h。0.5 C
第三法：測定凡士林及其他類似物質。3次或5次 鑒別，反映藥品的純雜程度
二、旋光度測定法：比旋度：偏振光透過1dm且每1ml中含有旋光性物質1g的溶液，在一定波長與溫度下測得的旋光度稱為比旋度。用于鑒別藥物或檢查藥物的純雜程度、含量測定。
以溶劑作空白校正，調節(jié)溫度至20 C 0.5C 。供試液不顯混濁或有小粒。
公式：
三、折光率測定法：指光線在空氣中進行的速度與在供試品中進行速度的比值。鑒別、純度、含量
折光率因溫度或光線波長的不同而改變。20 C 0.5 。 讀到0.0001
公式：
n----溶液的折光率 n----同溫度時水的折光率 F---被測液濃度增加1%時折光率增加數。 用作葡萄糖的快速測定用。
四、粘度測定法：用于區(qū)別或檢查藥品的純雜程度。
粘度分三種：動力粘度：帕秒 (Pa.s) 運動粘度：平方毫米每秒(mm /s)
第五章 化學分析法
第1節(jié) 重量分析法
重量分析法：以質量為測量值的分析方法。將被測組分與其他分離，稱重計算含量。精確到0.1-0.2 %
對低含量組分測定誤差較大，盡量避免用。水分測定，藥品中水中不溶物、熾灼殘渣、灰分仍用。
一、揮發(fā)法：利用被測組分具有揮發(fā)性或將其轉化為揮發(fā)性物質，稱取揮發(fā)前后揮發(fā)性物質算含量。
1、 直接揮發(fā)法：測吸收劑增加的量
2、 間接揮發(fā)法：測樣品所減少的量
二、萃取法：(提取重量法)用互不相容的溶劑萃取后稱重，適用于有機藥物的測定。
三、沉淀法：沉淀形式-稱量形式
步驟：取樣-溶解-加沉淀劑使其沉淀-過濾-洗滌-干燥(或熾灼)-至垣重-稱量-計算
重量分析法對沉淀形式要求：沉淀溶解度小，要純凈，易于過濾和洗滌，易于轉化為稱量形式。
重量分析法對稱量形式要求：稱量形式的組成應固定，化學穩(wěn)定性高，分子量要大。
1、 沉淀形成的過程包括晶核的生長和沉淀微粒的生長兩個過程。
2、 影響沉淀溶解度的因素： 沉淀溶解損失不3、 超過0.2mg 不4、 影響。
(1)同離子效應：當沉淀反應達到平衡后，向溶液中加入過量的沉淀劑，則構晶離子(與沉淀組分相同的離子)濃度增大，使沉淀的溶解度降低的效應，稱為同離子效應。
加入沉淀劑一般過量，易揮發(fā)過量50-100%，不揮發(fā)過量20-30% 。
(2)鹽效應：由于強電解質的存在而引起沉淀溶解度增大的現象，稱鹽效應。
(3)酸效應：溶液的酸度對沉淀溶解度的影響稱酸效應。 對弱酸鹽影響較大。
(4)絡合反應：進行沉淀反應時，若溶液中存在有能與構晶離子生成可溶性絡合物的絡合劑時，則會使沉淀溶解度增大，甚至不產生沉淀，這種現象稱絡合效應。
5、 影響沉淀純度的因素：
(1)共沉淀：產生原因有表面吸附(主要)、形成混晶、包埋或吸留(不能清洗除去，重結晶陳化)
(2)后沉淀：放置過程中沉淀吸出。
第二節(jié) 酸堿滴定法
酸堿滴定法：利用酸和堿在水中以質子轉移反應為基礎的滴定分析方法。
(1) 強酸滴定強堿： 如NaOH滴定HCl
一般濃度以0.1000mol /l ，突躍范圍4.3-9.7，指示劑 ：酚酞、甲基紅、甲基橙
(二)強堿滴定弱酸： 如NaOH滴定HAc，突躍范圍PH 7.74-9.7 ，計量點PH8.72 。選堿性范圍指示劑酚酞、百里酚酞。不能用酸性指示劑甲基紅，甲基橙。
(三)強酸滴定弱堿：HCl 滴定NH .H O ，PH6.24-4.3 ，計量點PH5.28 ，選甲基紅、溴甲酚綠 。
(四)強堿滴定多元酸：兩個計量點，用甲基橙和酚酞的混合指示劑。
第3節(jié) 沉淀滴定法
沉淀反應必須定量、迅速、有指示劑確定終點、吸附現象不妨礙終點。生成難溶性銀鹽的反應。
銀量法：利用AgNO 為標準溶液的沉淀滴定法。按所用指示劑不同分：
1、 鉻酸鉀法(MoHr法)：在中性溶液中，2、 加入K CrO (1ml)作指3、 示劑，4、 用AgNO 標5、 準液滴定 。
滴定條件：指示劑用量適當、酸度不過低過高、劇烈振搖、不宜測定I 和SCN、除去干擾離子。
6、 鐵礬指7、 示劑法(Volhard法)：用NH SCN為標8、 準溶液，9、 Fe為指10、 示劑，11、 在硝酸酸性液中測定。
滴定條件：被測物Cｌ時，注意沉淀轉化（過濾、加有機溶劑、用高濃度Fｅ指示）、強酸中
三、吸附指示劑法（Fajans法）：用硝酸銀標準溶液和吸附指示劑確定終點的方法。
第四節(jié) 配位(絡合)滴定法
EDTA(二乙胺四乙酸)與金屬離子絡合的特點：幾乎全部、1：1關系、可在水中滴定、大多無色
影響絡合反應平衡因素：酸度增高，MY穩(wěn)定性降低；其他絡合劑存在時也降低MY穩(wěn)定性。
第5節(jié) 氧化還原滴定法
涉及電子轉移的反應叫氧化還原反應，獲得電子的物質稱氧化劑(電位高)，失去電子的物質稱還原劑。
氧化還原反應是否完全用平衡常數K，K值越大，反應進行越完全，不說明反應速度 。
指示劑三類：自身指示劑、特殊指示劑和氧化還原指示劑。
氧化還原滴定方法：
(一)、碘量法：1、直接碘量法：終點：過量一滴I與淀粉(KI液)生成藍色吸附物。碘本身淡黃色。
條件：只能在酸性、中性、弱堿性進行。避免曝光和放置時間長(氧化)。
2、間接碘量法：只能在弱酸性、中性、弱堿性進行，增大KI量。
(二)、溴量法：主要測定芳香胺類和酚類有機藥物。苯環(huán)上有羥基和氨基，鄰位和對位氫易溴代反應。
一般用定量的溴酸鉀與過量的溴化鉀產生新生態(tài)的溴來代替。提高溫度加快反應。
(三)、鈰量法：用鄰二氮菲亞鐵作指示劑 優(yōu)點：Ce (SO ) ，穩(wěn)定，長時、曝光、加熱不引起濃度變化 、在HCl下測定、大部分有機物不作用，特別適合糖漿劑、片劑等制劑測定。
(四)、高錳酸鉀法：自身指示劑 條件：強酸中進行(氧化能力強)、用H SO 調節(jié)酸度(無氧化還原性)
(五)、高碘酸鉀法：
(六)、亞硝酸鈉法：在鹽酸下與芳伯胺或芳仲胺化合物起重氮化反應。
條件：溫度不宜過高(防HNO 分解)，強酸，滴定不宜過快。
第六節(jié) 非水滴定法
堿量法：以冰醋酸(或其他溶劑)為溶劑，高氯酸作滴定液、結晶紫為指示劑測定弱堿性物質及鹽類。
酸量法：以甲醇鈉為滴定液、麝香草酚藍作指示劑，乙二胺等為溶劑滴定弱酸性物質及鹽類。
原理：1、溶劑的酸堿性：弱酸性物質溶于堿性溶劑時，可增強物質的相對酸度。
2、溶劑的離解性：溶劑的自身離解常數越大，突躍范圍越大，終點越敏銳。
3、溶劑的極性：溶劑在極性強的溶劑中，介電常數大，易離解，酸(堿)強度大。
4、拉平效應與區(qū)分效應：水(拉平)、冰醋酸(區(qū)分)。
堿的測定：高氯酸的冰醋酸溶液為滴定劑，鄰苯二甲酸氫鉀作基準物質。測定堿性基團的藥物：
胺類、氨基酸類、含氮雜環(huán)、有機堿的鹽、弱酸鹽。生物堿、咖啡因、鹽酸麻黃堿、撲爾敏。
酸的滴定：羧酸類：苯甲酸 酚類、苯酚：磺酰胺類、磺胺嘧啶。
第六章 分光光度法
第一節(jié) 紫外可見分光光度法
一、基本原理
紫外--可見分光光度法：是根據物質分子對波長為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結構分析方法。操作簡單、準確度高、重現性好。
波長長(頻率小)的光線能量小，波長短(頻率大)的光線能量大。
100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m
通指
X-射線 紫外區(qū) 可見區(qū) 紅外區(qū) 微波區(qū) 無線電波區(qū)
Beer-lambert定律： A=E l c A--吸收度 E-吸收系數 l ---液層厚度 c---溶液濃度
吸收度濃度與厚度的關系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是單色光。
摩爾吸收系數：指在一定波長下，溶液濃度為1mol/L , 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
百分吸收系數：指在一定波長下，溶液濃度為1%(W/V) , 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
影響B(tài)eer定律因素：化學因素，光學因素
二、紫外--可見分光光度計： 主要部件：
1、 光源：要求光譜的光源，2、 氫燈和鎢燈(350nm)
3、 單色器：進口狹縫、準直鏡、色散元件(棱鏡和光柵)、聚焦透鏡和出口狹縫組成。
4、 吸收池：用光學玻璃制成的吸收池，5、 只能用于可見光區(qū)。用熔融石英(氧化硅)，6、 可見紫外光區(qū)。
7、 檢測器：光電池：(硒光電池：用于可見光；硅光電池：紫外可見光) 內阻小，8、 易疲勞。
光電管：內阻高，電流易放大 。
9、 訊號處理和顯示器
三、定性與定量方法：
(一)、定性鑒別：是多數有機化合物具有吸收光譜特征。一般用對比法。
1、對比吸收光譜特征數據 2、對比吸收度(或吸收系數)比值 3、對比吸收光譜的一致性
(二)、純度檢查：雜質檢查與雜質限量檢測
(三)、含量測定：
1、吸收系數法 2、標準曲線法 3、對照法
第二節(jié) 熒光分析法
熒光分析法：利用熒光的物理特性而進行定性與定量測定的方法。熒光法比紫外可見靈敏。
熒光光度計：激發(fā)光源、樣品池、檢測器、濾光片和單色器。
第三節(jié) 紅外分光光度計
紅外線：波長大于0.76um，小于500um的電磁波。 Hooke定律來描述分子的伸縮振動。
當分子的振動頻率與入射的紅外頻率相同時，分子對紅外產生吸收。伸縮振動和彎曲振動。
基頻峰：分子吸收一定頻率的紅外線，振動能級由基態(tài)(V=0)躍遷至第一激發(fā)態(tài)時產生的吸收峰。
倍頻峰：振動能級由基態(tài)躍至第二、三激發(fā)態(tài)。統(tǒng)稱泛頻峰。
吸收峰：用于鑒別官能團存在的吸收峰稱特征吸收峰。
指紋區(qū)：1250-400cm (8.0-25um)的低頻區(qū)稱為指紋區(qū)。
紅外分光光度計主要部件：光源、吸收池、單色器(棱鏡和光柵)和檢測器(真空熱電偶)及記錄裝置。
第七章 色譜法
第一節(jié) 概述
色譜法：是一種物理或物理化學分離方法。用于定性鑒別、純度檢查、含量測定。
分配系數：組分在固定相和流動相之間的分配平衡時的濃度之比。 K=
容量因子：又稱質量分配系數，即達到分配平衡后，組分在固定相和流動相中的質量之比。
第二節(jié) 薄層分析法
一般指吸附薄層色譜法，固定相為吸附劑的薄層吸附法。K值越大隨展開劑移動的速度越慢。
比移徝：在薄層色譜法中，組分的遷移距離( )與展開劑的遷移距離( )之比稱為比移值( ) 。
R 最佳范圍是0.3-0.5 ，可用范圍是0.2-0.8 。
吸附劑：吸附薄層色譜法的固定相。常用吸附劑有：硅膠、氧化鋁、硅藻土、纖維素和聚酰胺。
硅膠：在105-110 C加熱30分，使硅膠吸附力增加，稱為活化。具微酸性，適分離酸性中性物質。
氧化鋁：堿性、中性、酸性。中性用得多。
制備薄層板：要求吸附劑涂布均勻表面光滑，使用前檢查均勻度。2000版用機械涂布法。活化。
吸附劑與展開劑的選擇：分離極性較強的組分時，宜選用活性低(活度級別高)的薄層板，以極性強的展開劑展開。反之
點樣：體積宜在20ul 以下，樣徑不超過2-3mm ，點間距離為1.5-2.0cm，距底2.0cm 。
顯色方法：直接噴霧法、浸漬法、壓板法。
定性分析方法、純度檢查、定量分析方法(洗脫測定法和直接測定法)。
第三節(jié) 氣相色譜法
氣相色譜法：以氣體為流動相的色譜法稱為氣相色譜法。不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質分析。
原理：各組分在固定相與載氣(流動相)間分配系數不等，按大小依次被載氣帶出色譜柱，小先流出。
一、基本原理：
(一)、基本概念：
一個組分的色譜峰用三項參數：峰高或峰面積(用于定量)、峰位(用保留值表示，用于定性)、峰寬(用于衡量柱效)。
(1)、保留時間 (tR) ：從進樣開始到某個組分的色譜峰頂點的時間間隔。
(2)、死時間 (t0)：分配系數為零的組分的保留時間。
(3)、相對保留值 (r)：兩組分的調整保留值之比。
(4)、半峰寬 (Wh/2)：峰高一半處的峰寬。
(二)、塔板理論：
塔板理論方程式(高斯方程式)：
理論塔板式數： 理論塔板高度：
(三)、速率理論： H=A+B/u+Cu
影響塔板高度的因素：1、渦流擴散 2、縱向擴散 3、傳質阻抗
二、氣相色譜儀：
(1)、色譜柱：固定相與柱管組成。 填充柱、毛細管柱； 分配柱、吸附柱
(2)、固定液：高沸點的液體，操作下為液態(tài)。 甲基硅油、聚乙二醇等
選擇原則：按相似性、按主要差別、按麥氏差別選擇。
(3)、載體：化學惰性的多孔性微粒
(4)、毛細管色譜柱：開管型、填充型
(5)、檢測器：1、濃度型檢測器：熱導檢測器和電子捕獲檢測器
2、質量型檢測器：氫焰離子化檢測器
中國藥典2000對氣相色譜規(guī)定：除檢測器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得任意更改外，其他均可適當改變，色譜圖于30min內記錄完畢。
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