76說明雙縮脲法成為測(cè)定血清總蛋白參考方法的理由?并解釋其標(biāo)化法計(jì)算公式中的0.298是什么含義?
(1)我國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司推薦的雙縮脲法試劑配方是Doumas1981年推薦的優(yōu)化配方,此配方的精密度和準(zhǔn)確度優(yōu)于其它生化專著中介紹的不同配方;本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,試劑與蛋白質(zhì)肽鍵反應(yīng)專一,不受蛋白質(zhì)分子量和氨基酸組成的影響,干擾因素較少,故成為公認(rèn)的測(cè)定血清總蛋白的參考方法。
(2)Doumas等確定0.298為純蛋白—雙縮脲復(fù)合物的吸光系數(shù)。即按照Doumas的標(biāo)準(zhǔn)試劑配方,在波長(zhǎng)540nm,比色杯光徑1.0cm,分光光度計(jì)波長(zhǎng)帶寬≤2nm等標(biāo)化條件下,雙縮脲反應(yīng)液中蛋白質(zhì)濃度為1.0g/L時(shí)的吸光度。
77血清白蛋白溴甲酚綠(BCG)法為什么在反應(yīng)5S時(shí)讀取A值,而溴甲酚紫(BCP)法為什么定在60S以后?
因?yàn)檠灏椎鞍着cBCG呈現(xiàn)即刻反應(yīng)后反應(yīng)液顏色即不再加深,但是所測(cè)定的血清樣品中,除白蛋白外尚有相當(dāng)數(shù)量的a1-抗胰蛋白酶、a1-酸性糖蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、觸珠蛋白、c反應(yīng)蛋白和銅藍(lán)蛋白等所謂“慢反應(yīng)蛋白質(zhì)”,它們與BCG的反應(yīng)要在15min甚至1h才能完成。為了防止這種非特異性反應(yīng)的干擾,故將BCG法的讀取A值時(shí)間定在5s(或10s),這樣所測(cè)得的結(jié)果與免疫火箭電泳法高度一致。
BCP試劑只與白蛋白反應(yīng),不與白蛋白以外的其它蛋白質(zhì)顯色。故此法測(cè)定A值的時(shí)間可放在呈色后1h以內(nèi),不影響測(cè)定值的準(zhǔn)確性。
78何謂真血糖?判斷一項(xiàng)血糖測(cè)定方法的測(cè)定結(jié)果是否接近血糖真值,主要依靠方法的什么性能?試舉例加以說明。
所謂真血糖是指血液中的葡萄糖。
測(cè)定方法的特性越高其血糖測(cè)定結(jié)果越接近真值。例如同位素稀釋—質(zhì)譜法所測(cè)得的血糖值沒有偏差,是公認(rèn)的決定性血糖測(cè)定方法;已糖激酶(HK)法試劑兩個(gè)工具酶對(duì)底物高度專一,故其測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性很高,是公認(rèn)的血糖測(cè)定的參考性方法;而葡萄糖氧化酶(GOD)法中GOD對(duì)葡萄糖的專一性是很高的,但其第二步反應(yīng)的過氧化物酶(POD)特異性差,維生素C、膽紅素、尿酸等多種物質(zhì)能使H2O2還原,使測(cè)定結(jié)果偏低。所以GOD法只能用于常規(guī)分析。
79何謂Trinder反應(yīng)?試說明此反應(yīng)的分析特性。
Trinder反應(yīng)是指對(duì)氧化酶催化底物氧化過程中產(chǎn)生的H2O2在過氧化物酶作用下,與4—氨基安替匹林及苯酚生成紅色色素的反應(yīng)。此反應(yīng)首先由Trinder于1969年提出,故名。Trinder反應(yīng)最初使用苯酚作生色劑,后來有許多作者提出十余種化合物替代苯酚(如2.4—二氯酚等),使反應(yīng)的靈敏度得以顯著提高。Trinder反應(yīng)構(gòu)成了葡萄糖、膽固醇、甘油三脂及尿酸等酶法測(cè)定的基礎(chǔ),有較為重要的使用價(jià)值。但是由于催化Trinder反應(yīng)的過氧化物酶對(duì)底物專一性差,維生素C、尿酸、谷胱甘肽及膽紅素等還原性物質(zhì)也與色原性物質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)H2O2,從而使氧化過程中產(chǎn)生的H2O2被消耗,導(dǎo)致色素形成減少,測(cè)定結(jié)果偏低。此外,工具酶中如夾雜有較多的過氧化氫酶,也能消耗氧化產(chǎn)物H2O2,使被測(cè)物的測(cè)定值偏低。
80評(píng)述K、Na、Li元素原子火焰發(fā)射光譜的發(fā)生原理。
火焰光度分析法是一種發(fā)射光譜分析方法。樣品中的K、Na、Li原子受火焰的熱能作用而被激發(fā)處于高能級(jí)的激發(fā)態(tài)。處于激發(fā)態(tài)的原子不穩(wěn)定,要躍遷回到低能級(jí)的基態(tài)。當(dāng)此電子躍遷回到基態(tài)時(shí)就放出能量,發(fā)射出元素特有波長(zhǎng)的輻射譜線,利用此原理可進(jìn)行火焰光度分析。Na原子的3s基態(tài)電子經(jīng)火焰激發(fā)可躍遷到3p、3d或4p亞層中。當(dāng)此電子由3p返回到3s亞層時(shí)。則產(chǎn)生589nm波長(zhǎng)的輻射(黃色火焰)。K原子受火焰激發(fā)時(shí),4s電子可躍遷到4p、4d或5p亞層,若由4p返回4s基態(tài)時(shí),可輻射出767nm波長(zhǎng)的深紅色光譜。Li原子的2s電子受火焰激發(fā)可躍遷到2p、3p或3d亞層,若由2p返回2s基態(tài)時(shí),發(fā)射出光譜波長(zhǎng)為671nm(紅色火焰)。
81說明Fe、Zn、Cu、Mg的原子吸收光譜特征?
原子吸收分光光度法是基于從光源輻射出具有待測(cè)元素特征譜線的單色光,通過試樣蒸氣時(shí)被蒸氣中待測(cè)元素基態(tài)原子所吸收,由輻射譜線被減弱的程度來測(cè)定試樣中待測(cè)元素含量的方法。該方法的技術(shù)關(guān)鍵是采用由被測(cè)元素作陰極的空心陰極燈作光源,光源燈發(fā)出含有被測(cè)元素共振線的線光譜通過原子化器時(shí),其中的共振線被待測(cè)元素所吸收,吸收的多少與待測(cè)元素的含量有關(guān)。
Fe、Zn、Cu、Mg等元素強(qiáng)烈的特征性吸收譜線是:
Fe:248.3nm
Zn:213.8nm(空氣—乙炔火焰)
Cu:324.5nm
Mg:285.2nm(空氣—乙炔火焰)
82何謂血漿功能酶?舉例加以說明。
血漿功能酶是指在血漿中有確定的和特異生理生化功能的一類酶,它們不僅在血漿中發(fā)揮催化作用,而且酶在血漿中的濃度也明顯高于其它組織。血漿功能酶包括:
(1)大多數(shù)凝血因子和纖溶酶原:如凝血酶原(第Ⅱ因子)、前激肽釋放酶、纖維蛋白溶酶原等。
。2)參與血漿脂蛋白代謝的兩種酶:脂蛋白脂肪酶(LPL)和卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)。
。3)銅藍(lán)蛋白(亦稱亞鐵氧化酶)。
。4)腎素(即血管緊張肽原酶):腎素是由腎小球旁器的顆粒細(xì)胞合成并釋放進(jìn)入血液的一種蛋白水解酶,催化血管緊張素原轉(zhuǎn)變成血管緊張素Ⅰ。
。5)血漿膽堿脂酶,等。
83何謂酶的催化活性濃度?酶的活性單位如何表示?
。1)酶的催化活性濃度是酶含量測(cè)定的一種表示方法。它是利用酶的催化特性,通過測(cè)定被加速的反應(yīng)速度來間接的算出酶含量的高低,此法的結(jié)果不能用質(zhì)量單位,只能用反應(yīng)速度單位(μmol·min-1)來表示酶量的多少,并計(jì)算出一定體積(L)標(biāo)本中酶的含量(活性單位數(shù))。這種表示酶濃度的確切名稱是酶的催化活性濃度,簡(jiǎn)稱為酶活性濃度。
。2)酶活性單位有:①國(guó)際單位(在特定條件下每min催化1μmol底物轉(zhuǎn)化的酶量);②催量(katal,簡(jiǎn)稱Kat):它的定義是在最適條件下每s催化1mol底物轉(zhuǎn)化的酶量。Kat對(duì)血清酶活性測(cè)定而言顯得過大,故用μkatal或nkatal.兩者可換算
1IU=1μmol·min-1=16.67nmol·s-1=16.67nkatal
84解釋連續(xù)監(jiān)測(cè)法。說明本法為什么要在線性反應(yīng)期進(jìn)行測(cè)定?
(1)連續(xù)監(jiān)測(cè)法是指在適當(dāng)?shù)膬x器上,在不終止酶反應(yīng)的條件下,多點(diǎn)監(jiān)測(cè)整個(gè)酶促反應(yīng)過程中某一反應(yīng)引起的產(chǎn)物或底物隨時(shí)間變化的情況,在反應(yīng)速度恒定期間,以單位時(shí)間酶反應(yīng)初速度計(jì)算酶的活性濃度。由于本方法測(cè)定的是反應(yīng)速率,故又名“速率法”;又由于測(cè)定是在酶促反應(yīng)動(dòng)態(tài)期進(jìn)行的,故又稱“動(dòng)力學(xué)法”(也曾稱為“動(dòng)態(tài)法”)。但I(xiàn)FCC文件建議避免將本法稱為“動(dòng)態(tài)法”,而應(yīng)稱為“連續(xù)監(jiān)測(cè)法”。我國(guó)衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心亦推薦使用“連續(xù)監(jiān)測(cè)法”。醫(yī)學(xué)全.在線.網(wǎng).站.提供
。2)酶促反應(yīng)的線性反應(yīng)期是指在最佳條件下,酶促反應(yīng)速度保持恒定(零級(jí)反應(yīng)期)的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行的反應(yīng)。此時(shí)反應(yīng)產(chǎn)物的生成量與反應(yīng)時(shí)間呈正比例,單位時(shí)間內(nèi)吸光度的變化值亦與酶活性成正比例。這樣就能保證測(cè)定結(jié)果較為準(zhǔn)確可靠。
85解釋非結(jié)合膽紅素(Bu)、結(jié)合膽紅素(Bc)和δ膽紅素(Bδ)?
。1)非結(jié)合膽紅素(Bu)是指游離膽紅素,是血紅素的代謝產(chǎn)物,分子式為C33H36N4O,分子量584.7,金黃色,不溶于水,易溶于有機(jī)溶劑,不與重氮試劑直接顯色,是正常血清中的主要膽色素。
(2)結(jié)合膽紅素(Bc):在一分子非結(jié)合型膽紅素的兩個(gè)丙酸基側(cè)鏈上結(jié)合二個(gè)葡萄糖醛酸殘基即構(gòu)成膽紅素葡萄糖醛酸二酯,稱為結(jié)合膽紅素(Bc)。它是在肝細(xì)胞內(nèi)合成的,是膽汁中的主要膽紅素。水溶性,能與重氮試劑直接顯色,無毒性。
。3)δ—膽紅素(Bδ):在長(zhǎng)期高膽紅素血癥病人血漿中存在δ—膽紅素。Bδ有兩種形式:一種是脂型的Bδ,是一個(gè)丙酸基側(cè)鏈以共價(jià)鍵與Alb結(jié)合,另一個(gè)丙酸基側(cè)鏈結(jié)合著糖醛酸;未酯化型Bδ只有一個(gè)丙酸基與Alb結(jié)合。85%的Bδ能與重氮試劑直接顯色。Bδ既不被肝細(xì)胞攝取。也不能被腎小球?yàn)V過,致使它在循環(huán)血液中有較長(zhǎng)的停留時(shí)間。
86何謂腎清除率和內(nèi)生肌酐清除率?說明其判斷指標(biāo)。
。1)腎清除率是指單位時(shí)間內(nèi)(min)經(jīng)腎小球?yàn)V出的血漿濾液量(ml/min)。
。2)內(nèi)生肌酐清除率(ccr)是指單位時(shí)間(min)內(nèi),腎臟清除血漿內(nèi)生肌酐的血漿體積,其結(jié)果以ml/min表示。
。3)內(nèi)生肌酐清除率試驗(yàn)是判斷腎小球?yàn)V過功能的敏感指標(biāo),其判斷指標(biāo)主要有:
①參考值:男105±20ml/min
女95±20ml/min
、诔醪焦烙(jì)腎小球?yàn)V過功能損害的程度:
若Ccr70——51ml/min輕度損害
50——31ml/min中度損害
<30ml/min重度損害
慢性腎功能衰竭的病人:
若Ccr20——11ml/min為早期腎功能衰竭
10——6ml/min為晚期腎功能衰竭
<5ml/min為終末期腎功能衰竭
③指導(dǎo)治療:Ccr<30ml/min限制蛋白質(zhì)攝入
<30ml/min噻嗪類利尿藥治療無效
く10ml/min應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行透析治療
87解釋Jaffe反應(yīng)及“假肌酐”兩個(gè)名詞,并說明如何消除“假肌酐”對(duì)Jaffe反應(yīng)的干擾?
。1)Jaffe反應(yīng)是指血漿中的肌酐與堿性苦味酸鹽反應(yīng),生成黃紅色的苦味酸肌酐復(fù)合物的反應(yīng)。
。2)Jaffe反應(yīng)特異性不高,標(biāo)本中的維生素C、丙酮酸、丙酮、乙酰乙酸、甲基多巴、高濃度的葡萄糖、蛋白質(zhì)和一些抗菌素如青霉素G、頭孢噻吩、頭孢西丁、頭孢唑啉等也都能與堿性苦味酸生成紅色復(fù)合物。這些不是肌酐但能起顯色反應(yīng)的物質(zhì)稱為“假肌酐”。
(3)消除“假肌酐”干擾,主要采取兩種辦法:
①用吸附劑(硅酸鋁或純化漂白土)吸附或用離子交換樹脂除去“假肌酐”。
、谠谒俾史y(cè)定中,設(shè)置20S延遲期,即在樣品與堿性苦味酸試劑混勻后的20—80S之間(此時(shí)期中肌肝與苦味酸反應(yīng)占主導(dǎo)地位,稱為“窗口期”進(jìn)行測(cè)定,可得到較準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果。
88試述ApoAI、ApoB100和ApoCⅡ的合成部位及其主要功能?
。1)ApoAI由肝細(xì)胞合成,是HDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白,其功能是激活LCAT(卵磷脂膽固醇;D(zhuǎn)移酶),在膽固醇的逆向運(yùn)轉(zhuǎn)中起重要作用。
。2)ApoB100由肝臟合成,是LDL.VLDL的結(jié)構(gòu)蛋白(肝臟合成的每一個(gè)VLDL顆粒中只含1分子apoB100,LDL由VLDL轉(zhuǎn)變,每個(gè)LDL顆粒中只含1分子apoB100),也是LDL受體的配體。
。3)ApoCⅡ主要來源于肝臟。其主要功能是激活脂蛋白脂酶(LPL),啟動(dòng)LPL對(duì)乳糜微粒和VLDL中甘油三脂的水解反應(yīng)。
89何謂基質(zhì)效應(yīng)?試述它對(duì)血脂測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的影響。
。1)“基質(zhì)”是指標(biāo)本中除分析物以外的一切組份。對(duì)血清膽固醇測(cè)定而言,就是指膽固醇以外血清中的一切成份及其物理化學(xué)性質(zhì)。
。2)“基質(zhì)效應(yīng)”是指:①標(biāo)本中除分析物以外的其它成分對(duì)分析物測(cè)定值的影響;②基質(zhì)對(duì)分析方法準(zhǔn)確測(cè)定分析物能力的干擾。廣義說來,基質(zhì)效應(yīng)也應(yīng)包括已知的干擾物(如膽固醇測(cè)定中的膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸等都是干擾物),但目前只將基質(zhì)效應(yīng)限于生物材料中未知或未定性的物質(zhì)或因素(如粘度、pH等)的影響;|(zhì)效應(yīng)所致分析結(jié)果的偏差稱為基質(zhì)偏差(matrixbias)。
。3)基質(zhì)效應(yīng)對(duì)血脂測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的影響:以總膽固醇測(cè)定為例,1979年由Cooper證實(shí),在膽固醇酶法測(cè)定中,由于校準(zhǔn)液與病人血清的反應(yīng)性不同,可使總膽固醇的測(cè)定值偏低5%~7%.80年代也有不少報(bào)告指出校準(zhǔn)液中的膽固醇用酶法測(cè)定回收率偏低。在甘油三脂、HDL-C及LDL-C酶法測(cè)定中也出現(xiàn)了不同程度的基質(zhì)效應(yīng)。因此采用定值人血清做校準(zhǔn)物來克服基質(zhì)效應(yīng)對(duì)血脂分析結(jié)果準(zhǔn)確性的影響是十分重要的。
90說明2.3-DPG對(duì)Hb與O2結(jié)合的影響?
2.3-DPG是2.3-二磷酸甘油酸的縮寫,它是紅細(xì)胞糖酵解支路的產(chǎn)物。在成熟紅細(xì)胞內(nèi),2.3-DPG的含量在動(dòng)脈血中為3400μmol/L,靜脈血中為4940μmol/L,比糖酵解中間產(chǎn)物(如3—磷酸甘油酸等)高出數(shù)百倍。研究確定2.3-DPG在紅細(xì)胞內(nèi)有重要生理功能,即能降低Hb和O2的親和力,促使HbO2釋放O2以適應(yīng)組織對(duì)氧的需求。
2.3-DPG在近中性pH環(huán)境中與Hb(脫氧血紅蛋白)以等分子(1:1)結(jié)合,結(jié)合常數(shù)為105mol-1;但是它與HbO2(氧合血紅蛋白)的結(jié)合常數(shù)相比只有前者的1/100,可見2.3-DPG主要與脫氧Hb結(jié)合。當(dāng)它與HbO2的二條β鏈形成鹽鍵結(jié)合后,使Hb變成T型(緊密型),降低了Hb與O2的親和力,從而促進(jìn)HbO2解離釋放O2.這種作用在PO2較高的肺部影響較小,但血液流經(jīng)組織時(shí),紅細(xì)胞內(nèi)存在的2.3-DPG就發(fā)揮作用,使HbO2大量分解釋放出O2、供組織利用。
91何謂Bohr效應(yīng)?說明其發(fā)生的機(jī)理及生理意義。
。1)Bohr效應(yīng):血液pH對(duì)Hb與O2親和力的影響稱為Bohr效應(yīng)。
。2)Bohr效應(yīng)的發(fā)生機(jī)制與pH改變引起Hb構(gòu)象改變有關(guān)。即當(dāng)H+濃度增加或PCO2增加時(shí),可促進(jìn)Hb的a鏈氨基端纈氨酸的氨基和a鏈122、β鏈146組氨酸殘基的異咪唑基與H+結(jié)合,使其帶正電荷,從而促進(jìn)鹽鍵的形成,使Hb變成T型(緊密型)結(jié)構(gòu),導(dǎo)致Hb對(duì)O2的親和力降低。反之,鹽鍵斷裂,Hb變成R型(松弛型),增大了Hb對(duì)O2的親和力。醫(yī)學(xué) 全在.線提供
(3)Bohr效應(yīng)具有重要生理意義:當(dāng)血液流經(jīng)肺部時(shí),CO2從血液向肺泡擴(kuò)散,血液PCO2下降,[H+]也降低,均使Hb對(duì)O2的親和力增加,氧離曲線左移,在任一PO2下Hb氧飽和度增加,血液運(yùn)氧量加大;當(dāng)血液流經(jīng)組織時(shí),CO2從組織進(jìn)入血液,血液PCO2和[H+]升高,Hb對(duì)O2親和力降低,曲線右移,促進(jìn)HbO2解離向組織釋放更多的O2.
92什么是Porter—Silber反應(yīng)和Zimmermann反應(yīng)?說明它們的用途?
。1)Porter和Silber的比色法是測(cè)定尿17羥類固醇(17-OHCS)的常用方法。用提取劑提取酸性尿(pH2.4~2.6)中的17-OHCS,在提取相中加入Porter-Silber試劑,在60℃水浴中保溫30min.完成Porter-Silber氏顏色反應(yīng)。此反應(yīng)的實(shí)質(zhì)是17-OHCS與鹽酸苯肼的硫酸溶液作用,生成一種能產(chǎn)生黃色腙的21-醛),通過與同樣處理標(biāo)準(zhǔn)比色,計(jì)算出尿液中17-OHCS的含量。
。2)Zimmermann反應(yīng)是測(cè)定尿中17-酮類固醇(17-KS)的方法學(xué)基礎(chǔ)。尿中17-KS結(jié)合物在酸性(pH2.0)環(huán)境中,經(jīng)加熱水解,用乙醚提取水解后游離的17-KS,洗滌后使17-KS與堿性間二硝基苯反應(yīng),生成特征性紫色反應(yīng),即Zimmermann反應(yīng)。
93什么是OCV和RCV?說明實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行OCV和RCV的工作條件?
。1)OCV是“最佳條件下的變異”的英文縮寫。它表示本室在目前條件下該檢驗(yàn)項(xiàng)目所能達(dá)到的最好的精密度水平。各種不同方法中OCV的測(cè)定必須遵循一條基本原則,即OCV的測(cè)定應(yīng)使用與常規(guī)工作相同的檢驗(yàn)方法、試劑和儀器。但對(duì)儀器必須重新進(jìn)行校正;試劑應(yīng)新鮮配制并進(jìn)行標(biāo)定;由技術(shù)熟練的工作人員操作;在全部測(cè)定過程中應(yīng)嚴(yán)格控制溫度、光照、反應(yīng)時(shí)間等一切可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素,并正確的計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果。
。2)RCV是“常規(guī)條件下的變異”的英文縮寫。它表示本室目前條件下,常規(guī)工作中該檢驗(yàn)項(xiàng)目的精密度水平。做RCV的基本要求是把質(zhì)控樣品完全當(dāng)病人標(biāo)本,每天由作常規(guī)檢驗(yàn)的操作者隨同病人樣品同批測(cè)定,而不要有任何特殊照顧,以便能真實(shí)反映常規(guī)檢驗(yàn)的精密度。
94什么是任選式全自動(dòng)生化分析儀?在生化自動(dòng)分析工作中采取哪些抗交叉污染的措施?
(1)任選式全自動(dòng)生化分析儀具有在一個(gè)通道中任意選擇測(cè)定多種項(xiàng)目(一般可高達(dá)60項(xiàng)以上)。所謂任選有兩種方式。其一是輸入樣品的順序,測(cè)定完一個(gè)樣品的所有項(xiàng)目后再做下一個(gè)樣品。另一種方式是按做批量測(cè)定的方式,將輸入的所有樣品按欲測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行組合分類。相同的項(xiàng)目一起測(cè)定,測(cè)完一種項(xiàng)目再測(cè)另外一種項(xiàng)目。
(2)全自動(dòng)生化分析儀在工作中防止交叉污染的主要措施有:
、偌訕犹结、試劑探針的自動(dòng)清洗與沖洗功能;
、诒壬蟮淖詣(dòng)沖洗功能;
、圩詣(dòng)光掃描比色皿,剔除不合格的比色皿;
、苡(jì)算機(jī)自動(dòng)降低具有相似測(cè)定方法的測(cè)定項(xiàng)目間的交叉污染概率。
95解釋真值、誤差、精密度和準(zhǔn)確度?
(1)真值:標(biāo)本中被測(cè)物的真實(shí)濃度稱為真值。
。2)誤差:誤差是實(shí)驗(yàn)誤差的簡(jiǎn)稱,是某量值的給出值與其客觀真值之差。
。3)精密度:精密度是表征測(cè)定結(jié)果中隨機(jī)誤差大小程度的指標(biāo),即同一標(biāo)本在一定條件下多次重復(fù)測(cè)定所得到的一系列單次測(cè)定值的符合程度叫做精密度。
。4)準(zhǔn)確度:準(zhǔn)確度是指測(cè)定結(jié)果與真值接近的程度。準(zhǔn)確度主要受測(cè)定系統(tǒng)中系統(tǒng)誤差的支配(系統(tǒng)誤差越小準(zhǔn)確度越高),也受隨機(jī)誤差的影響。所以準(zhǔn)確度是表示測(cè)定結(jié)果中系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差的綜合。
96如何區(qū)分一個(gè)分析方法的特異性差和受干擾物質(zhì)的干擾?舉例加以說明。
。1)某些非分析物與試劑發(fā)生反應(yīng),影響了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性,說明該方法特異性差。例如在用溴甲酚綠法測(cè)定血清白蛋白(Alb)時(shí),BCG除了與Alb發(fā)生“快反應(yīng)”外,還與血清中的a1酸性糖蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、觸珠蛋白、C反應(yīng)蛋白和銅藍(lán)蛋白等進(jìn)行所謂的“慢反應(yīng)”,使該法Alb測(cè)定值偏高,表明BCG方法用于血清白蛋白測(cè)定時(shí)其特異性差。
(2)所謂干擾是指某些非分析物改變了被測(cè)定物和試劑間的反應(yīng),從旁影響了分析物被該方法檢測(cè)的正確度。例如在GOD—PAP法測(cè)定葡萄糖的試驗(yàn)中,維生素C、尿酸等還原性物質(zhì)也能使H2O2還原,導(dǎo)致血糖測(cè)定結(jié)果偏低。
97解釋PCR、DNA—PCR、RT—PCR、原位PCR和定量PCR?
。1)PCR是聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerasechainreaction)的英文縮寫,是近年來發(fā)展起來的一種在體外特異擴(kuò)增某一目的DNA片段的技術(shù)。
。2)DNA—PCR:以DNA為模板,擴(kuò)增特定核苷酸序列。主要用于檢測(cè)特定基因或DNA片段的存在,并常與核酸分子雜交結(jié)合,分析檢定基因突變。
。3)RT—PCR:用提取的mRNA或總RNA(含有mRNA)為模板,通過逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增cDNA.是檢測(cè)特定基因表達(dá)水平的主要方法之一,也是用于鑒別、診斷RNA病毒的重要技術(shù)。
(4)原位PCR:與原位雜交一樣,原位PCR也無需提取DNA/RNA,直接用組織切片和細(xì)胞進(jìn)行PCR或RT—PCR.它既能鑒定含有靶DNA/RNA序列的細(xì)胞,又能確定靶DNA/RNA序列在細(xì)胞內(nèi)或染色體上的位置。
(5)定量PCR:PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳分離轉(zhuǎn)移膜上,與放射性核素或化學(xué)發(fā)光標(biāo)記的核酸探針雜交。根據(jù)放射自顯影或化學(xué)發(fā)光后底板爆光的強(qiáng)弱,用密度計(jì)掃描定量。此法在基因診斷中應(yīng)用甚廣。
98簡(jiǎn)述膽固醇在體內(nèi)的轉(zhuǎn)化途徑。
(1)轉(zhuǎn)變?yōu)槟懰岷兔撗跄懰幔?/P>
。2)合成膽固醇脂;
。3)在腸道內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榧S固醇隨糞便排出體外;
。4)合成皮質(zhì)類固醇和性激素;
。5)轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D.
99試列舉五種主要在肝臟進(jìn)行的代謝。
。1)可利用糖原提供血糖;
。2)進(jìn)行糖異生;
(3)在脂類代謝過程中生成酮體;
。4)尿素的生成;
。5)進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化作用。
100試述α1-微球蛋白(α1-m)、β2-微球蛋白(β2-m)的生化特點(diǎn)及其測(cè)定對(duì)早期腎損傷的診斷價(jià)值?
。1)α1-m:α1-m是一種糖蛋白(含糖量為20%),分子量較。3KD),pI4.5~5.0.α1-m由肝臟產(chǎn)生。血液中的α1-m有游離型和與IgA結(jié)合型兩種存在形式,其游離型可通過腎小球?yàn)V過,絕大部分在腎小管重吸收降解,故在各類腎病引起的腎小球?yàn)V過功能降低時(shí),血清α1-m濃度升高。此時(shí)血清α1-m濃度與血清肌酐、血尿和β2-m等呈正相關(guān)(r=0.7以上)。
(2)β2-m:β2-m存在于除紅細(xì)胞和胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞以外所有有核細(xì)胞,尤其在單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中含量豐富,在免疫應(yīng)答中起重要作用。β2-m分子量約為11.8KD,由100個(gè)氨基酸組成的單鏈多肽,pI5.70.它可被腎小球?yàn)V過,腎小球的濾過系數(shù)達(dá)0.90,又可被近端腎小管全部重吸收降解。血中β2-m的半衰期為1.8h.血中β2-m濃度主要受腎小球?yàn)V過功能的影響。故血清β2-m能早期判斷腎小球?yàn)V過功能,較測(cè)定血清肌酐更靈敏。腎移植成功后血清
β2-m很快下降,當(dāng)發(fā)生排斥反應(yīng)時(shí),由于腎濾過率下降,并且因排斥引起淋巴細(xì)胞增多(β2-m合成增多),血清β2-m常增高。