自從1983年Marshall和Wsrren報(bào)道從人胃粘膜活體標(biāo)本中成功的分離出幽門(mén)螺桿菌（helicobacter pylori, Hp)以來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)此進(jìn)行了廣泛深入的研究。近年來(lái)分子生物學(xué)技術(shù)初步顯示了它在流行病學(xué)、分子遺傳學(xué)學(xué)及其臨床應(yīng)用上的價(jià)值。
診斷Hp感染的方法很多，包括快速尿素酶試驗(yàn)、Warthin-Starry銀染以及細(xì)菌培養(yǎng)，這些方法的共同缺點(diǎn)是不能達(dá)到足夠的敏感性以確定治療后細(xì)菌是否被徹底根除，也不能確定Hp感染的來(lái)源和傳播途徑。13C和14C呼吸試驗(yàn)方法雖然可靠，但費(fèi)用較高。血清抗體的檢測(cè)則不能確定是否有新近感染，也不以評(píng)價(jià)治療的效果。而近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的分子生物學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)單、快速、可靠，不僅對(duì)Hp的診斷具有高度敏感性和特異性，而且還可以用于對(duì)Hp的分型。
最早的研究方法是用限制性核酸內(nèi)切酶直接消化培養(yǎng)，鑒定后的Hp染色體DNA，經(jīng)過(guò)瓊脂糖電脈按大小分離所得的片段，來(lái)比較各株細(xì)菌的基因組DNA酶切圖型。Langenberg等報(bào)道了用HindⅢ限制性內(nèi)切酶分析Hp的全基因差異。Wetherall等用斑點(diǎn)雜交法評(píng)價(jià)了同位素與非同位素標(biāo)記Hp全基因探針的實(shí)用性。Mortomi等通過(guò)DNA-RNA雜交方法，用人工合成的Hp特異性寡核苷酸探針，同16SrRNA序列互補(bǔ)，證實(shí)這種探針比較敏感，可以檢出少至5000個(gè)～10000個(gè)Hp。
近年來(lái)聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechain reaction，PCR)技術(shù)已經(jīng)用于Hp的診斷，該技術(shù)的敏感性比寡核苷酸探針增加了100倍，可以檢出少至100個(gè)Hp。目前Hp的尿素酶基因和16SrRNA基因的部分序列已經(jīng)測(cè)出，為PCR特異性引物的選擇提供了依據(jù)。我們以一對(duì)與16SrRNA基因互補(bǔ)的寡核苷酸為引物（CP1/CP2)，建立了從胃粘膜活組織標(biāo)本中檢測(cè)Hp感染的PCR技術(shù)。用該方法檢測(cè)Hp標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTc 11637，NCTC11848及50株從臨床病人胃粘膜活組織中分離的Hp菌株均產(chǎn)生450bp的片段，其敏感性為0.1pg的HpDNA，相當(dāng)于100個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，而對(duì)12株非Hp菌株（包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎雙球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌及空腸彎曲菌NCTC11351)以及無(wú)Hp感染的人胃粘膜細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。我們還用PCR檢測(cè)了96例因上消化道癥狀而行胃鏡檢查的患者，結(jié)果表明PCR檢查的Hp陽(yáng)性率高于常規(guī)檢查法。我們還對(duì)17例經(jīng)不同方案治療后用常規(guī)方法檢查（尿素酶試驗(yàn)、銀染、及培養(yǎng)均陰性)而被認(rèn)為Hp被根除的病人，用PCR檢查發(fā)現(xiàn)4例Hp陽(yáng)性。以往我們對(duì)一些常規(guī)方法未能檢出而實(shí)際上還存在Hp的病人，誤認(rèn)為Hp被根除而放棄治療，這些病人短期內(nèi)Hp再現(xiàn)實(shí)際上是治療不徹底，這對(duì)于指導(dǎo)Hp感染的治療有十分重要的臨床意義。www.gydjdsj.org.cn
PCR還可以從石蠟包埋的胃粘膜組織中檢測(cè)Hp，因此可以對(duì)胃及十二指腸患者進(jìn)行回顧性研究。PCR的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可以成功地檢出人胃粘膜以外的用常規(guī)方法不能檢測(cè)的Hp，包括胃液、唾液、牙菌斑及糞便中的Hp。用巢式引物（nested primer)雙擴(kuò)增(reamplification)或同時(shí)在引物擴(kuò)增序列內(nèi)部選擇一寡核苷酸作探針，對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行southernblt檢測(cè)，則可使敏感性增加10倍～100倍，可檢出難以培養(yǎng)的球形Hp。
因?yàn)镻CR檢測(cè)Hp的敏感性高、特異性強(qiáng)、檢查快速；HindⅢ限制性內(nèi)切酶可以分析Hp全基因差異，可以用它來(lái)鑒定Hp菌株，所以分子生物學(xué)技術(shù)作為Hp流行病學(xué)的研究工具，其敏感性和特異性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)Hp的常規(guī)檢查法，因而有利于確定Hp感染的來(lái)源和途徑。Langenberg等報(bào)道1例在前幾次胃鏡檢查時(shí)經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)和組織學(xué)檢查證明為Hp陰性的患者，在進(jìn)行另一次胃鏡檢查后則變?yōu)镠p陽(yáng)性。經(jīng)DNA內(nèi)切酶分析發(fā)現(xiàn)其HpDNA酶切圖型完全相同，證明了經(jīng)內(nèi)鏡檢查而引起人與人之間的醫(yī)源性傳播。宋敏等用巢式PCR從唾液中檢出了Hp，說(shuō)明口—口的傳播可能是Hp在人與人之間傳播的另一條途徑。
近年來(lái)國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道，Hp染色體DNA限制性內(nèi)切酶分析以及Hp的核糖核酸型可以作為Hp菌株的鑒別。Langenberg等用限制性內(nèi)切酶DNA分析法研究發(fā)現(xiàn)，從不同病人分離的Hp菌株酶切圖譜各不相同，而從同一病人1年～2年內(nèi)連續(xù)分離的多株Hp，其DNA酶切圖型穩(wěn)定不變，因此，利用限制性內(nèi)切酶的DNA消化圖譜（DNA digest pattern)可以鑒別抗Hp治療停藥4W后再次出現(xiàn)的Hp是復(fù)發(fā)（recrudescence)，還是新菌株再感染（reinfection)。
我們最近建立了PCR單鏈構(gòu)象多態(tài)（single-strand conformation polymoophisms,SSCP)技術(shù)。該方法簡(jiǎn)單快速、敏感性強(qiáng)、圖型簡(jiǎn)單、易于比較。PCR-SSCP不僅可以用于大規(guī)模Hp流行病學(xué)調(diào)查，而且能準(zhǔn)確評(píng)估治療后再現(xiàn)的Hp是復(fù)發(fā)還是再感染。我們對(duì)10例Hp陽(yáng)性患者采用抗Hp治療，比較治療前后分離的菌株染色體DNA203bp片段SSCP圖型，發(fā)現(xiàn)9例病人治療前后的菌株具有相同的單鏈構(gòu)象，說(shuō)明是治療上的失敗，而不是新菌株現(xiàn)感染。
利用分子生物學(xué)技術(shù)來(lái)檢測(cè)Hp才剛剛起步，對(duì)于Hp的診斷、致病機(jī)理、遺傳學(xué)、流行病學(xué)及其與胃癌的關(guān)系和感染治療的研究中還存在許多問(wèn)題需要用分子生物學(xué)去研究，證實(shí)和闡明。特別是PCR技術(shù)發(fā)展迅速，日臻完善，在Hp的研究中，將有著廣泛的應(yīng)www.gydjdsj.org.cn/Article/用前景。
