本品系精制破傷風(fēng)類毒素經(jīng)氫氧化鋁吸附制成。用于預(yù)防破傷風(fēng)。
1 毒素制造
制造破傷風(fēng)毒素應(yīng)在隔離的具有專用消毒設(shè)備的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室的墻面、地面及實(shí)驗(yàn)臺(tái)應(yīng)使用便于消毒的材料。工作人員應(yīng)經(jīng)過培訓(xùn)并接受破傷風(fēng)類毒素全程免疫，以后每10年進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，凡發(fā)生外傷未完全治愈前不能參加工作。
1.1 菌種
1.1.1 應(yīng)選用中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)或同意的產(chǎn)毒效價(jià)高、免疫力強(qiáng)的破傷風(fēng)菌株，必要時(shí)可對(duì)菌種進(jìn)行篩選。
1.1.2菌種應(yīng)定期作全面性狀檢查（如細(xì)菌形態(tài)、純菌試驗(yàn)、糖發(fā)酵反應(yīng)、產(chǎn)毒試驗(yàn)及特異性中和試驗(yàn)等)，并有完整的傳代、檢定記錄。
1.1.3菌種應(yīng)用凍干或其他適宜方法保存在2～8℃。
1.2 培養(yǎng)基
制造種子管及毒素培養(yǎng)基所用的酪蛋白、黃豆蛋白、牛肉等蛋白質(zhì)應(yīng)適當(dāng)加深水解。其他原材料應(yīng)盡量減少對(duì)人體產(chǎn)生過敏反應(yīng)的物質(zhì)，不得含有可引起人體毒性反應(yīng)的物質(zhì)。培養(yǎng)基原材料應(yīng)保證質(zhì)量，所用化學(xué)原料應(yīng)符合《中國(guó)生物制品主要原材料試行標(biāo)準(zhǔn)》。
1.3 毒素
1.3.1 毒素制造過程應(yīng)嚴(yán)格控制雜菌污染，經(jīng)顯微鏡檢查或純菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)污染者應(yīng)廢棄。
1.3.2 毒素須經(jīng)除菌過濾后方可進(jìn)行下步制造程序，亦可殺gydjdsj.org.cn菌后進(jìn)行精制。
1.3.3 毒素Lf測(cè)定
用生理鹽水將Lf 檢定用標(biāo)準(zhǔn)破傷風(fēng)抗毒素稀釋至100Lf/ml，按一定間隔遞增量加于一列絮狀檢定用試管中，每管加待檢毒素1ml，搖勻后立即放入50℃水浴中，以首先出現(xiàn)絮狀者判定毒素的Lf值，并記錄絮狀反應(yīng)時(shí)間。
1.3.4用于生產(chǎn)的毒素不得低于40Lf/ml。
2 類毒素制造
2.1 毒素或精制毒素的脫毒
毒素或精制毒素中加入適量甲醛溶液，置適宜溫度進(jìn)行脫毒。所用甲醛溶液等級(jí)應(yīng)不低于化學(xué)純。
2.2 脫毒試驗(yàn)
每瓶取樣，用體重300～400g豚鼠1只，皮下注射10ml。精制毒素脫毒者可事先用生理鹽水稀釋成100Lf/ml，皮下注射5ml，于注射后第7、14、21天進(jìn)行觀察，動(dòng)物不應(yīng)有破傷風(fēng)癥狀，到期每只動(dòng)物體重不得較注射前減輕且健存者為合格，發(fā)生破傷風(fēng)癥狀者應(yīng)繼續(xù)脫毒，體重減輕者應(yīng)予重試。
2.3 脫毒試驗(yàn)合格的類毒素應(yīng)做Lf測(cè)定。類毒素應(yīng)為黃色或棕黃色透明液體。
2.4類毒素之保存時(shí)間，自脫毒合格之日起保存于2～8℃不得超過3年。
3 精制
3.1 毒素或類毒素可用等電點(diǎn)沉淀、超濾、硫酸銨鹽析等方法或其他適宜方法精制。
3.2 用于精制的類毒素應(yīng)透明，無肉眼可見之染菌。
3.3 精制時(shí)所用化學(xué)藥品等級(jí)應(yīng)不低于化學(xué)純或符合《中國(guó)藥典》規(guī)定，蒸餾水應(yīng)新鮮。
3.4 類毒素精制后應(yīng)加0.01%(g/ml)硫柳汞防腐并盡快除菌過濾。
3.5用同一菌種、培養(yǎng)基處方、精制方法制造的類毒素在同一容器內(nèi)混合均勻后除菌過濾者為1批。
4 精制類毒素的檢定和保存
4.1pH值應(yīng)為6.6～7.4。
4.2 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。無菌試驗(yàn)不合格時(shí)可重新除菌過濾，如制品有肉眼可見之染菌應(yīng)廢棄。
4.3 效價(jià)測(cè)定
每瓶取樣進(jìn)行Lf測(cè)定。測(cè)定方法見1.3.3項(xiàng)。
4.4 純度
精制類毒素的純度應(yīng)在1500Lf/mgPN以上。
4.5 安全試驗(yàn)
每亞批取樣，等量混合，用生理鹽水稀釋為250Lf/ml，用體重300～400g豚鼠4只，每只皮下注射2ml。于注射后第7、14、21天進(jìn)行觀察并稱體重。動(dòng)物不應(yīng)有破傷風(fēng)癥狀，局部無化膿、壞死，到期每只動(dòng)物體重比注射前增加者為合格。
4.6 保存與效期
保存于2～8℃。類毒素精制者自精制之日起，先精制后脫毒制品從脫毒試驗(yàn)合格之日起，效期為3年半。
5 吸附劑配制
5.1 吸附劑配制過程所用的器具應(yīng)清潔、蒸餾水應(yīng)新鮮，各種藥品等級(jí)應(yīng)不低于化學(xué)純。
5.2 配制氫氧化鋁，可用三氯化鋁加氨水法或三氯化鋁加氫氧化鈉法，用氨水配制者需透析除氨后使用。
5.3配制成的氫氧化鋁原液應(yīng)為淺藍(lán)色或乳白色的膠體懸液，不應(yīng)含有凝塊或異物。
5.4 氫氧化鋁原液應(yīng)取樣測(cè)定氫氧化鋁及氯化鈉含量。
6 吸附精制類毒素的制造
6.1 吸附制品每ml應(yīng)含精制破傷風(fēng)類毒素7～10Lf。
6.2 氫氧化鋁用量不得超過3mg/ml。
6.3 吸附制品應(yīng)加0.005%～0.01%(g/ml)硫柳汞為防腐劑。
6.4同批精制類毒素用同批吸附劑吸附者為1批，用大罐吸附時(shí)每罐為1批，但所用精制破傷風(fēng)類毒素、氫氧化鋁各不得超過3批。
7 成品檢定
gydjdsj.org.cn/zhicheng/7.1 理化性狀
7.1.1吸附精制破傷風(fēng)類毒素振搖后為乳白色均勻懸液，無搖不散的凝塊及異物。
7.1.2pH值應(yīng)為6.0～7.0。
7.1.3 氫氧化鋁含量不應(yīng)超過3mg/ml。
7.1.4 氯化鈉含量應(yīng)為0.75%～0.9%(g/ml)。
7.1.5 硫柳汞含量不應(yīng)超過0.01%(g/ml)。
7.1.6 游離甲醛含量不應(yīng)超過0.02%（g/ml)。
7.2 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
7.3 安全試驗(yàn)
每亞批取樣等量混合，用體重300～400g，豚鼠4只，每只注射2.5ml于腹部皮下，注射后于第7、14、21天各觀察1次并稱體重，動(dòng)物不應(yīng)有破傷風(fēng)癥狀，注射部位無化膿、壞死，到期體重比注射前增加者為合格。
7.4 效力試驗(yàn)
每亞批取樣等量混合，用體重300～400g豚鼠4只，每只皮下注射0.5ml，第30天采心血，分離血清，等量混合，測(cè)定破傷風(fēng)抗毒素單位，至少應(yīng)含1IU/ml。
抗毒素單位測(cè)定方法：
用pH7.0～7.4之硼酸硼砂緩沖生理鹽水，將被檢血清做系列稀釋，各取1ml放入一列試管中，然后各加入5個(gè)L+/100量破傷風(fēng)標(biāo)準(zhǔn)毒素1ml（由0.05IU/ml破傷風(fēng)標(biāo)準(zhǔn)抗毒素標(biāo)定)，蓋上膠塞，混合均勻，放37℃結(jié)合45分鐘，每個(gè)混合液各用體重15～17g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml。
同時(shí)設(shè)對(duì)照組，即取0.05IU/ml的標(biāo)準(zhǔn)抗毒素1ml，加入5個(gè)L+/100的標(biāo)準(zhǔn)毒素1ml，放37℃結(jié)合45分鐘。用體重15～17g小白鼠3只，每只于后腿皮下注射0.4ml，每日觀察動(dòng)物發(fā)病情況并記錄。以72～120小時(shí)動(dòng)物全部死亡為判定標(biāo)準(zhǔn)。
以被檢樣品與對(duì)照組動(dòng)物死亡數(shù)相同之最高稀釋度判定之。
亦可按WHO推薦的效力檢定方法（見附錄)進(jìn)行。
7.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
生產(chǎn)工藝有改變時(shí)應(yīng)做穩(wěn)定性試驗(yàn)。抽3批不同批號(hào)的精制類毒素配制的成品，保存于2～8℃，在效期結(jié)束之日，進(jìn)行效力檢定，應(yīng)符合規(guī)程要求。
7.6 鑒別試驗(yàn)
抽取樣品加枸櫞酸鈉將吸附劑溶解后作絮狀試驗(yàn)，或?qū)悠氛{(diào)pH至9.0作凝膠免疫沉淀試驗(yàn)，以出現(xiàn)絮狀反應(yīng)或免疫沉淀反應(yīng)者為合格。
8 保存與效期
保存于2～8℃。自吸附之日起效期為3年半。
