培育目標分定向、不定向兩種,定向是予先確定好要獲得什么樣的品種,然后有計劃地進行培育,這種方法能在較短的時間里獲得優(yōu)良的品種。定向時有以細菌感受性為選育指標,如小鼠對沙門氏菌的感受性;也有采用遺傳指標,如性成熟、初產(chǎn)日令、妊娠間隔、產(chǎn)仔數(shù)、哺乳量及離乳時體重等。不定向的是無意識的選擇,預先交沒有想要培育具有哪些特點的新品種,只是人們自然把比較有價值的留下,讓它繁殖,去掉價值不大的品種,這樣無意中起了選擇的作用,這種選擇過程是比較緩慢的,待純化后回過頭來做實驗,測定其特性。
(一)基礎種群的選擇
1.從野生鼠中選擇。可能具有實驗小鼠所沒有的未知遺傳特性,但由于野生鼠需要經(jīng)過一段馴化時期,有時人工繁殖有困難,所有這種情況應加以考慮。
2.從起源于沒有經(jīng)過的新繁殖的近交群中選擇。由于其個體之間存在著某種程度的遺傳變異近親繁殖和選擇,把可能獲得并需要的特性固定下來。
3.從雜交群中選擇。這種雜交群包括,近交系與近交系之間;近交系與遠交系之間;遠交系與遠交系之間;野生鼠與遠交群之間的各種類型的雜交。尤其是“三元”即三個不同品系之間,“四元”即四個品系之間的雜交,有可能通過交配而形成多種的基因組合,從中選出具有一定特性的鼠種作為基礎群。
4.如果其它實驗室和保種單位有質(zhì)量較好基礎種群種子,并有相應的檢測數(shù)據(jù)證實其確為好種子,也可直接引起,這樣較為簡便易行。但引進時必須了解和掌握必要的資料,如家譜號(Pedigreed No.)及其歷史來源、交配方式、近交代數(shù)、遺傳組成、生物學特性等。
(二)初代種鼠的選擇
在選好基礎 種鼠以后,進一步選出初代種群是極其重要的。
1.首先檢查個體形態(tài),如毛色、體型以及對外界刺激反應的敏感性等,有目的的選擇后,即可進行繁殖。
2.對初代種群所產(chǎn)生的仔代,應進行病原微生物和藥物感受性以及腫瘤誘發(fā)率等方面的檢查,必須選留那些經(jīng)過檢查,而且有一定特性的雙親所生下的1~3胎仔鼠,作為下一代生產(chǎn)的種鼠。
3.第二代以后種群的選擇。與選初代種群基本相同,但應注意二點:
(1)除注意其所需特性以外,還應注意其初產(chǎn)年齡、產(chǎn)仔數(shù)量、哺乳能力等方面的繁殖特性,應選擇質(zhì)量優(yōu)良者。
(2)盡量在5~7代中選擇具有所需特性的種鼠進行交配,因為5~7代是兄妹交配選擇效果最好的代數(shù),因此5~7代交配的組合盡可能大些,超過10代選擇效果則較差。
培育近品系的重要手段,一是交配繁殖,二是人工選擇,兩者經(jīng)常是同時進行的。交配繁殖的目的在于使存在于基代雙親(即用于培育近交系的最初一對小鼠)中的不同遺傳位點的不同基因通過連續(xù)許多代的重新組合達到純合的程度,并保持足夠數(shù)量的后裔可供交配時選擇。人工選擇的目的是挑選符合培養(yǎng)需要(有繁殖能力或其它的特殊性狀)和淘汰不需要的個體。
(一)近交的交gydjdsj.org.cn/zhicheng/配方式
開始培育近交系種群和引起的近交系原種的維持,一般采用以下三種方法:
1.單線法:從近交系原種選出3~5個兄妹對進行兄妹交配,從中選出生產(chǎn)能力最好的一對進行繁殖,然后從中選擇一對作為下一代生產(chǎn)的雙親,如此一代代的延續(xù)下去。這個方法生產(chǎn)的個體比較均一,但選擇的范圍太小,由于只有單線的仔代,易發(fā)生斷代危險。
2.平行法:選3~5對兄妹對,每個兄妹對都選留下一代種鼠,一代代的延續(xù)下去,這個方法生產(chǎn)的個體不太均一,但選擇范圍大,易發(fā)生分化。
3.選優(yōu)法:這個方法保留了上述兩個方法的優(yōu)點克服了兩個方法中的缺點,是個較好的保種方法。假定每代選6對,每對都選自同一雙親的仔代同胞兄妹,在繁殖過程中,每一代均保持6對,當某對出現(xiàn)不孕或生產(chǎn)能力降低,而不適于繼續(xù)繁殖時,則可從另一對所生的后代中選擇優(yōu)良者加以代替。近交系原種動物的維持方法見圖3-2。
圖3-2近交系原種群(基礎群)的維持方法
(二)交配繁殖
1.近交系的培育要在專用固定的飼養(yǎng)室內(nèi)進行。為了避免別的鼠系的進入和防止可能發(fā)生的感染,應有嚴密的隔離設備和措施。如墻壁門窗都不能有縫道,飼養(yǎng)罐蓋子要十分嚴密,不能讓任何小鼠隨便進入。外觀相似種系不同的動物應分室飼養(yǎng)。工作人員進入飼養(yǎng)室時需帶口罩,非飼養(yǎng)人員不能隨便進入。飼養(yǎng)罐、飲器、食具等使用前都要滅菌消毒等。
2.應該嚴格遵照單對配對,父母同罐的要求。這樣便于隨時檢查和發(fā)現(xiàn)問題。而且雄鼠不離開雌鼠可以減少搞錯譜系的危險,雄鼠也不干擾幼鼠的哺育和成長。一般不應采取一雄二雌的交配飼養(yǎng)方式,因為兩個雌鼠可能同時懷孕,有時難于辨認年齡相仿的仔鼠與母鼠的關(guān)系。
3.對同系的每個鼠都應有詳細明確的譜系和戶籍記錄:包括飼養(yǎng)罐號,同對的雌雄鼠號碼(可根據(jù)父母鼠號碼、胎數(shù)、同胎中第幾號等確定)、培育代數(shù)、生育日期、胎數(shù)、產(chǎn)雌雄仔鼠數(shù)、斷乳后存活的雌雄仔鼠數(shù),選作傳代交配的仔鼠號等等。記錄不全或戶籍登記錯誤往往會造成無法挽救的損失,特別是當這個錯誤未被及時發(fā)覺時。如果對一個動物譜系身份有懷疑,應立即予以丟棄。另外,所有飼養(yǎng)罐也要加貼有明確記錄的標簽并隨時進行檢查,發(fā)現(xiàn)任何情況都就立即記入戶籍記錄。
4.選用第一、二胎同胎仔鼠作b×s交配比b×o交配更易處理,而且常常繁殖的更好。如有必要也可用同父母不同胎的仔鼠配對。譬如在一胎仔鼠的性別完全或大部分相同的時候,經(jīng)過很多代的近交繁殖以后,有時也可以用親緣關(guān)系較遠的堂(表)兄妹進行交配。當然這時近交系數(shù)要退回到它們的共同祖先(對堂兄妹交配來說是退回到祖代)這一代的F值。但如這種做法只是為了想提高繁殖較差的生育率,那么倒不如停止這條線的繁殖,另找一個生育較高的亞系作為近交繁殖的新起點更為妥善,因為前面的做法即使能夠培育出一個近交系來,它的后裔也往往難以提供足夠的實驗動物數(shù)量。
5.在近交系培育過程中,為了保證對生育力有一定的選擇范圍(生育力的選擇常常需要挑選多產(chǎn)和斷乳后存活的仔鼠較多的亞系進行交配繁殖),每一代都應保留一定數(shù)目(3~4個)的亞系,以后隨著代數(shù)的增加,除留下最后2~3代分出的亞系外,其余可陸續(xù)淘汰或拋棄,直到最后留下一個可追溯到基代的品系。因此除了記錄下譜系和戶籍之外,常常還需要隨時繪制象下面的那些譜系圖,如圖3-3,以便分清或隨時終止某些亞系。
圖3-3 近交系培育過程中動物的譜系圖
提供交配繁殖的亞系選擇應特別注意:gydjdsj.org.cn/wszg/
(1)這個亞系應具有培育所需要的性狀。
(2)至少與準備終斷的亞系有差不多的生育率和生活力。在繁殖良好的種系中一般在第3~4代以后就可終斷其它的亞系而只留一個亞系。如果子裔不太多,至少需傳5~6代甚至10代以后才能這樣作。
6.在完成20代b×s交配繁殖而建成一個近交系之后,要繁殖足夠的動物提供實驗需要,同時又不放棄選擇最適合的動物進行繁殖并盡可能的保持遺傳的一致性,最好的作法是從近交系中取出幾對較好的動物繼續(xù)照上面的辦法進行b×s交配傳代,并保持譜系和戶籍記錄,同時把其余的動物另室飼養(yǎng),讓最后三代任意交配,加速繁殖?梢悦抗薹1雄4雌,待受孕后取出母鼠,用它們的后代提供實驗需要。開始時,應注意多保留雌鼠。