一、原理
定量的抗原加入到含有一定量的相應(yīng)抗體的瓊脂糖凝膠中，在電場(chǎng)作用下，引起抗原抗體的遷移和相互反應(yīng)，當(dāng)比例合適時(shí)形成肉眼可見(jiàn)的沉淀峰，由于電泳繼續(xù)進(jìn)行，樣品孔不斷有抗原移向抗原抗體復(fù)合物的沉淀峰，因抗原過(guò)剩使沉淀溶解而在前面又形成新的抗原抗體復(fù)合物的沉淀峰。如此反復(fù)向前，直到再無(wú)游離抗原而反應(yīng)終止，形成上行火箭狀的沉淀峰，其沉淀峰高度和抗gydjdsj.org.cn/sanji/原的濃度成正比，與同樣條件下的已知濃度的抗原血清比較，即可求得待測(cè)血清的抗原含量。
二、試劑（以ApoB為例)
1．瓊脂糖。
2．巴比妥鈉緩沖液（μ=0.05，pH=8.6):巴比妥鈉10.30g，巴比妥1.84g、甘氨荎1.0g、PEg 60004g，加900ml水加溫助溶，待冷，加1mol/L調(diào)pH至8.6，混勻，轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶?jī)?nèi)，再加水到刻度，測(cè)試pH后裝瓶待用。
3．羊抗人ApoB血清（效價(jià)1：128以上)
4．ApoB標(biāo)準(zhǔn)血清。
5．固定液：1%鞣酸或10%三氯醋酸。
6．氨基黑10B染色液：氨基黑10B0.1g，溶于100ml甲醇-醋-水溶液（7：1：2)。
三、操作
1．用巴比妥鈉緩沖液配制1.5%瓊脂糖液，在水浴煮溶，置56℃水箱備用。
2．取巴比妥鈉緩沖液3.36ml入小三角燒瓶?jī)?nèi)，再加抗人ApoB抗血清0.04ml，充分混和，預(yù)溫至56℃。
3．在預(yù)溫至56℃的3.4ml抗血清緩沖液內(nèi)，加入1.5%瓊脂糖3.5ml，混勻，立即倒入預(yù)封好的有機(jī)玻璃架內(nèi)，待凝。
4．用打孔器按圖打孔，孔徑3mm。孔距3mm。
5．置凝膠板于水平電泳槽內(nèi)，兩極用三層濾紙搭橋，抗原一端接陰極，另一端接陽(yáng)極。
6．以電壓12V/cm通電，用微量進(jìn)樣器準(zhǔn)確加入等測(cè)血清5μl（1：20或1：30稀釋)。
電泳2～3h后，關(guān)閉電源，置凝膠板于10.0%三氯醋酸液固定15～20min，取出膠板，在黑色背景燈光下量取沉淀峰高度，如圖18-3所示。
.jpg)
圖18-3 免疫gydjdsj.org.cn/Article/火箭瓊脂糖電泳圖
7．計(jì)算
（1)查標(biāo)準(zhǔn)曲線。
（2)按下式計(jì)算：
.jpg)
8．如果需要也可將凝膠板置0.9% NaCl液漂洗過(guò)夜更換蒸餾水漂洗，底板襯以硬薄膜，爾后置染色液染色，脫色后可見(jiàn)明顯的沉淀峰，干燥，以便長(zhǎng)期保存。
