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這是檢查細菌性疾病常用的方法，也可對球蟲病和其它寄生蟲病作出診斷。
1．涂片鏡檢
用病料涂片，不經(jīng)染色，直接鏡檢，可用于曲霉菌病、球蟲病和其它寄生蟲病的診斷。診斷曲霉菌病時，直接取肺和氣囊上的結(jié)節(jié)，置載玻片上，用另一載玻片將結(jié)節(jié)壓碎后，抹片，可以直接在低倍鏡下觀察有無菌絲和孢子；診斷球蟲病時，刮取帶血的腸內(nèi)容物少許置載玻片上，涂一薄層，加一滴干凈水于低倍鏡下觀察有無卵囊和裂殖體；診斷隱孢子蟲病時，可以直接取呼吸道、法氏囊等內(nèi)容物抹片，鏡檢可見到大量的隱孢子蟲體。
2．涂片染色鏡檢
通過用病料涂片、染色和鏡檢，可以對細菌性疾病作出初步診斷，如雞霍亂、葡萄球菌病等。用消毒過的剪刀取一小塊病理組織，在潔凈的載玻片上輕觸一下，制成觸片或輕抹一下制成抹片，涼干后，在酒精燈火焰上來回通過3～4次，進行固定，然后再經(jīng)美藍或瑞氏染液，在油鏡下觀察。如見到大量兩極濃染的短桿菌，則為雞霍亂；如見到大量成堆的球菌，則為葡萄球菌病。
3．常用的染色方法及染液配制
常用的細菌染色方法主要有兩種類型，一是簡單染色法，只應(yīng)用一種染料進行染色的方法，如美藍染色法；二是復(fù)染色法，應(yīng)用兩種或兩種以上的染料或再加媒染劑進行染色的方法。染色時，有些是將染料分別先后使用，有些則同時混合使用，染色后不同的細菌和物體，或者細菌構(gòu)造的不同部分可以呈現(xiàn)不同的顏色，有鑒別細菌的作用，又可稱為鑒別染色，如革蘭氏染色法、抗酸性染色法、瑞特氏染色法和姬姆薩染色法等。
(1)美藍染色法
在干燥、固定好的抹片上，滴加適量的美藍染色液，以足夠覆蓋涂抹點為好，經(jīng)1～2分鐘，水洗，用吸水紙吸干或自然干燥，但不能烤干，鏡檢。
堿性美藍(亦稱駱氏美藍)染色液的配制：美藍1．48克溶于100毫升95％酒精中制成美藍飽和酒精溶液，取其30毫升，加入0．01％氫氧化鉀水溶液100毫升，混合即成。此染色液密閉保存，可多年不壞。
(2)革蘭氏染色法
在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液，經(jīng)1～2分鐘，水洗；加革蘭氏碘溶液于抹片上媒染，作用1～3分鐘，水洗；加95％酒精于抹片上脫色，約30～60秒，水洗，加稀釋石炭酸復(fù)紅(或沙黃水溶液)復(fù)染10～30秒，水洗；吸干或自然干燥，鏡檢。革蘭氏陽性菌呈藍紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。
草酸銨結(jié)晶紫(亦稱赫克氏結(jié)晶紫)染色液的配制：結(jié)晶紫13．87克溶于100毫升95％酒精中制成結(jié)晶紫飽和酒精溶液，取其2毫升，加蒸餾水18毫升稀釋10倍，再加入1％草酸銨水溶液80毫升，混合過濾即成。
革蘭氏碘溶液的配制：將碘化鉀2克置乳缽中，加蒸餾水約5毫升，使之完全溶解，再加入碘片1克，予以研磨，并徐徐加水，至完全溶解，然后注入瓶中，補加蒸餾水至全量為300毫升即成。此液可保存半年以上，當(dāng)產(chǎn)生沉淀或褪色后即不能再用。
沙黃水溶液的配制：沙黃3．41克溶于100毫升95％酒精中制成沙黃飽和酒精溶液，將其用蒸餾水稀釋10倍即成。此液保存期以不超過4個月為宜。
石炭酸復(fù)紅染色液的配制：取3％復(fù)紅酒精溶液10毫升，加入5％石炭酸水溶液90毫升，混合過濾即成。
(3)抗酸性染色法
萋－尼(Ziehl—Neelsen)氏抗酸性染色法：首先在已干燥、固定好的抹片上，滴加較多量的石炭酸復(fù)紅染色液，在玻片下以酒精燈火焰微微加熱至發(fā)生蒸氣為度(不要煮沸)，微微發(fā)生蒸氣持續(xù)3～5分鐘，水洗。然后用3％鹽酸酒精(加濃鹽酸3毫升于95％酒精97毫升中即成)脫色，至標(biāo)本五色脫出為止，充分水洗。再用堿性美藍染液復(fù)染約1分鐘，水洗。最后吸干，鏡檢，抗酸性細菌呈紅色，非抗酸性細菌呈藍色。
抗酸性染色法之二：在固定后的抹片上滴加金永(Kinyoun)氏石炭酸復(fù)紅液，染3分鐘。然后連續(xù)水洗90秒，再滴加加鮑脫(Gabbott)氏復(fù)染液復(fù)染1分鐘。連續(xù)水洗1分鐘，吸干，鏡檢�？顾嵝跃始t色，其它菌呈藍色。①金永氏石炭酸復(fù)紅液的配制：將堿性復(fù)紅4克溶于95％乙醇20毫升中，緩緩加入蒸餾水100毫升并振搖，再加入石炭酸(化學(xué)純)9毫升，混合；②加鮑脫氏復(fù)染液的配制：先將美藍1克溶于無水乙醇20毫升中，加蒸餾水50毫升，再加濃硫酸20毫升即成。
抗酸性染色法之三：滴加石炭酸復(fù)紅液于已干燥固定好的抹片上，染色1分鐘，水洗。再滴加1％美藍酒精溶液復(fù)染20秒，水洗，干燥，鏡檢。抗酸性菌呈紅色。
gydjdsj.org.cn/shouyi/tu/wenda/ 鏡檢前對光檢查染色片，標(biāo)本務(wù)必全呈藍色，如標(biāo)本呈紅色或棕色表明復(fù)染不足，應(yīng)再做復(fù)染5～10秒鐘，再觀察，如仍未全呈藍色時，仍可反復(fù)復(fù)染，至符合要求為止。
(4)瑞特氏染色法
方法一：抹片自然干燥，然后在標(biāo)本上滴加瑞特氏染色液，為了避免很快變干，可稍多加些染色液，或者視情況補充滴加；經(jīng)1～3分鐘，再加約與染液等量的中性蒸餾水或緩沖液，輕輕晃動玻片，使之與染液混勻經(jīng)5分鐘左右，直接用水沖洗(不可先將染液傾去)，吸干或烘干，鏡檢。細菌染成藍色，組織、細胞等物呈其它顏色。
方法二：抹片自然干燥，然后按涂抹點大小蓋上一塊略大的清潔紙片，在其上輕輕滴加染色液，至略浸過濾紙，并看情況補滴，保持不變干，染色3～5分鐘；其后直接用水沖洗，吸干或烘干，鏡檢。此法所用染色液經(jīng)濾紙過濾，可大大避免沉渣黏附于抹片上而影響鏡檢觀察。
瑞特氏染色液的配制：取瑞特氏染料0．1克置瑪瑙乳缽中，徐徐加入甲醇，研磨以促其溶解；將溶液倒人有色中性玻璃瓶，并數(shù)次以甲醇洗滌乳缽，亦倒入瓶中，最后使全量為60毫升即可；后置暗處過夜，次日過濾即成。此染色液須置于暗處，其保存期約為數(shù)月。
(5)姬姆薩氏染色法
在5毫升新煮過的中性蒸餾水中滴加5～10滴姬姆薩染色液原液，即稀釋成為常用的姬姆薩染色液；抹片經(jīng)甲醇固定并干燥后，在其上滴加足量染色液或?qū)⒛ㄆ胧⒂腥旧旱娜旧字校旧?0分鐘，或者染色數(shù)小時至24小時，取出水洗，吸干或烘干，鏡檢。細菌呈藍青色，組織、細胞等呈其它顏色，視野常呈紅色。
姬姆薩染色液的配制：取姬姆薩染料0．6克于50毫升的甘油中，置55～60℃水浴中1．5～2小時，然后加入甲醇50毫升，靜置1天以上，過濾即成，作為姬姆薩染色液原液貯存。
染色前，于每毫升蒸餾水中加入上述原液1滴，即成姬姆薩氏染色液。應(yīng)當(dāng)注意，所用蒸餾水必須為中性或微堿性，若蒸餾水偏酸，可于每10毫升左右的蒸餾水加入1％碳酸鉀溶液1滴，使其變成微堿性。
