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人乳頭瘤病毒16型外殼蛋白病毒樣顆粒及其制備方法和用途

公開(公告)號 CN101148661A  
公開(公告)日 2008.03.26  
申請(專利)號 CN200610127387.2  
申請日期 2006.09.18  
專利名稱 人乳頭瘤病毒16型外殼蛋白病毒樣顆粒及其制備方法和用途  
主分類號 C12N15/09(2006.01)I  
分類號 C12N15/09(2006.01)I;C12N15/866(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;C12N7/01(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所  
發(fā)明(設(shè)計)人 許雪梅;許于飛;張洪濤;宋國興;司靜懿;劉世德  
地址 100005北京市東單三條5號  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司  
代理人 程 偉  
國省代碼 北京;11  
主權(quán)項 一種病毒樣顆粒,其特征在于該病毒樣顆粒由選自序列為SEQ ID N0.1的HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或核苷酸序列為SEQ ID NO.2的HPV16L1N/L2-LTK63嵌合基因所編碼,該病毒樣顆粒由下列步驟獲得: 1)使用pFastBacDual-HPV16L1N、pFastBacDual-HPV16L1N/L2或pFastBacDual-HPV16L1N/L2-LTK63linkB重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌DH10Bac; 2)篩選鑒定獲得分別重組有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重組Bacmid; 3)將所述重組Bacmid轉(zhuǎn)染對數(shù)生長期的昆蟲細胞,轉(zhuǎn)染后收集上清,獲得含有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重組桿狀病毒; 4)用所述含有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重組桿狀病毒感染對數(shù)生長期的Sf9昆蟲細胞,使重組桿狀病毒在感染細胞內(nèi)分別表達導(dǎo)入的HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63基因; 5)裂解感染有含HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重組桿狀病毒的細胞,純化獲得HPV16L1NVLPs、HPV16L1N/L2VLPs或HPV16L1N/L2-LTK63嵌合病毒樣顆粒。  
摘要 本發(fā)明涉及人乳頭瘤病毒16型病毒樣顆粒,及其生產(chǎn)方法和用途,在生產(chǎn)中使用了對N端改造的主要衣殼蛋白基因和C末端融合改造的大腸桿菌熱不穩(wěn)定腸毒素LTK63的次要衣殼蛋白L2融合基因;在桿狀病毒一昆蟲細胞表達體系中生產(chǎn)L1NVLPs、L1N/L2VLPs和L1N/L2-LTK63嵌合病毒樣顆粒(cVLPs)。源自HPV16L1N基因的病毒樣顆粒產(chǎn)量高;本發(fā)明還涉及所述病毒樣顆粒在制備疫苗中的應(yīng)用,該疫苗免疫原性好,可預(yù)防HPV16感染及相關(guān)病變。  
國際公布  
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