| 公開(公告)號 | CN101139387A |
| 公開(公告)日 | 2008.03.12 |
| 申請(專利)號 | CN200710029286.6 |
| 申請日期 | 2007.07.20 |
| 專利名稱 | 一種重組可溶性人FGFR2胞外段及其生產(chǎn)方法與應(yīng)用 |
| 主分類號 | C07K14/47(2006.01)I |
| 分類號 | C07K14/47(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61K36/17(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 暨南大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 洪 岸;汪 炬;張志成 |
| 地址 | 510630廣東省廣州市天河區(qū)石牌 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州粵高專利代理有限公司 |
| 代理人 | 陳 衛(wèi) |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種重組可溶性人FGFR2胞外段的生產(chǎn)方法，其特征在于包括如下步驟： (1)目的基因截短型FGFR2的構(gòu)建； 根據(jù)截短型FGFR2胞外段氨基酸序列，按照大腸桿菌密碼子偏好性原則設(shè)計(jì)四對引物，四對引物序列分別如序列表NO：1～NO：4所示，由內(nèi)而外分別進(jìn)行四輪重疊延伸擴(kuò)增，首先是F1、R1互為模版擴(kuò)增，然后以第一輪產(chǎn)物作為模版，F(xiàn)1、R1作為引物進(jìn)行下一輪的擴(kuò)增，如此進(jìn)行4輪擴(kuò)增； (2)FGFR2雙突變型的構(gòu)建； 針對S252W和P253R雙突變的引物稱為M252+253_F和M252+253_R，序列如序列表NO：5所示； (3)雙酶切FGFR2基因與載體，連接構(gòu)建重組載體，轉(zhuǎn)化宿主菌，構(gòu)建FGFR2基因工程菌； (4)培養(yǎng)FGFR2基因工程菌，分離、清洗、溶解包涵體得到包涵體溶解液； (5)純化包涵體； (6)復(fù)性； (7)超濾、凍干得到可溶性人FGFR2胞外段。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種重組可溶性人FGFR2胞外段及其生產(chǎn)方法與應(yīng)用。本發(fā)明在通過大腸桿菌高效表達(dá)FGFR2的基礎(chǔ)上，對影響其復(fù)性效率的各種因素進(jìn)行了定性定量研究，確定了重組人可溶性人FGF受體胞外段體外變復(fù)性的較為合適的方法，使其復(fù)性效率達(dá)到10％～20％，且成本低、周期短、適合大規(guī)模生產(chǎn)。本發(fā)明利用游離的FGFRs的胞外段與血液及腫瘤組織中的FGFs結(jié)合，降低了游離FGFs的水平，從而競爭性抑制了FGFs的信號，有效抑制了腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移以及血管形成，并以S252W+P253R雙突變型FGFR2胞外段的效果最佳。 |
| 國際公布 |
