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胚胎源性多能干細(xì)胞向心臟起搏細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN101100655A  
公開(kāi)(公告)日 2008.01.09  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200710042044.0  
申請(qǐng)日期 2007.06.15  
專利名稱 胚胎源性多能干細(xì)胞向心臟起搏細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的方法  
主分類號(hào) C12N5/06(2006.01)I  
分類號(hào) C12N5/06(2006.01)I;C12N5/08(2006.01)N  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 張 喜;張傳森  
地址 200433上海市翔殷路800號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 上海德昭知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司  
代理人 丁振英  
國(guó)省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 一種胚胎源性多能干細(xì)胞向心臟起搏細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的方法,其特征在于該方法包括: I.胚胎源性多能干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定 采用全骨髓直接貼壁法獲得原代培養(yǎng)的細(xì)胞,然后按有限稀釋法進(jìn)行克隆培養(yǎng)獲得該細(xì)胞的純化系,通過(guò)對(duì)CD133、SSEA-1、CD45、Oct-4和Nanog標(biāo)記物的檢測(cè)進(jìn)行鑒定; II.胚胎源性多能干細(xì)胞向心臟起博細(xì)胞的誘導(dǎo)分化 向胚胎源性多能干細(xì)胞施加旁分泌因子、胞外基質(zhì)組分層粘連蛋白、纖維連接蛋白,誘導(dǎo)胚胎源性多能干細(xì)胞分化為心臟起搏細(xì)胞。  
摘要 本發(fā)明涉及干細(xì)胞誘導(dǎo)分化技術(shù)領(lǐng)域。目前構(gòu)建生物心臟起搏器的細(xì)胞移植方法主要是以胚胎源性干/祖細(xì)胞和成體間充質(zhì)干細(xì)胞作為細(xì)胞來(lái)源。本發(fā)明利用胚胎源性多能干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化心臟起搏細(xì)胞,采用全骨髓直接貼壁法獲得原代培養(yǎng)的細(xì)胞,按有限稀釋法進(jìn)行克隆培養(yǎng)獲得該細(xì)胞的純化系,通過(guò)施加旁分泌因子內(nèi)皮素-1或神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1,胞外基質(zhì)組分層粘連蛋白、纖維連接蛋白等基質(zhì)膠;同時(shí)轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)起搏基因HCN4的方法體外誘導(dǎo)胚胎源性多能干細(xì)胞向起搏細(xì)胞方向分化。本發(fā)明提供一種供給廣泛、無(wú)免疫原性、不涉及倫理學(xué)問(wèn)題的起搏細(xì)胞來(lái)源,為臨床治療病態(tài)竇房結(jié)綜合癥等緩慢性心率失常帶來(lái)希望。  
國(guó)際公布  
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