| 公開(公告)號 | CN101092607A |
| 公開(公告)日 | 2007.12.26 |
| 申請(專利)號 | CN200710074498.6 |
| 申請日期 | 2007.05.17 |
| 專利名稱 | 一種從貼底生長的細胞系獲得細胞克隆球的方法 |
| 主分類號 | C12N5/06(2006.01)I |
| 分類號 | C12N5/06(2006.01)I;C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 深圳職業(yè)技術學院 |
| 發(fā)明(設計)人 | 金 剛;代建國 |
| 地址 | 518055廣東省深圳市南山區(qū)西麗湖 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 深圳市維邦知識產權事務所 |
| 代理人 | 黃 莉 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權項 | 一種從貼底生長的細胞系獲得細胞克隆球的方法，其特征在于，其包括如下步驟： 步驟一、將細胞置于常規(guī)有血清培養(yǎng)基中進行常規(guī)培養(yǎng)，讓細胞貼底生長； 步驟二、培養(yǎng)7～20天后，當懸浮的細胞中，完整的單個細胞達到一定數(shù)量時，收集懸浮細胞； 步驟三、將收集的懸浮細胞離心，棄去上清液，再用HBSS液清洗剩余物(含有具有較強增殖能力的單個細胞)； 步驟四、將清洗后的剩余物置于至少添加有生長因子的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)； 步驟五、培養(yǎng)10～20天后，即可獲得直徑在50～100微米的克隆球，克隆球部分呈懸浮狀，部分為貼底生長，把懸浮的克隆球和貼底的克隆球及貼底細胞分開培養(yǎng)，并定期更換培養(yǎng)基以維持培養(yǎng)基中有效成分的含量，培養(yǎng)瓶中即會持續(xù)不斷地生長出來新的克隆球。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開一種從貼底生長的細胞系獲得細胞克隆球的方法，包括如下步驟：將細胞置于常規(guī)有血清培養(yǎng)基中進行常規(guī)培養(yǎng)，讓細胞貼底生長；培養(yǎng)7～20天后，收集懸浮細胞；離心處理懸浮細胞，棄去上清液，再用HBSS液清洗剩余物；將清洗后的剩余物置于至少添加有生長因子的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)；培養(yǎng)10～20天后，即可獲得克隆球，把懸浮的克隆球分離出來單獨培養(yǎng)，貼底的克隆球和貼底細胞仍在一起培養(yǎng)，并定期更換培養(yǎng)基，即會持續(xù)不斷地生長出新的克隆球。本發(fā)明方法簡便，且不用消化酶，也不用機械方法制得單細胞懸液，可持續(xù)地獲得遺傳背景完全一致的干細胞克隆球；可廣泛應用于干細胞理論研究、再生醫(yī)學、新藥開發(fā)等領域。 |
| 國際公布 |
