| 公開(公告)號 | CN101012271A |
| 公開(公告)日 | 2007.08.08 |
| 申請(專利)號 | CN200710010200.5 |
| 申請日期 | 2007.01.24 |
| 專利名稱 | 一種從制備海藻酸鹽微膠囊的廢棄物中回收蛋白的方法 |
| 主分類號 | C07K1/36(2006.01)I |
| 分類號 | C07K1/36(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 大連理工大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 修志龍;張 杰;李曉輝 |
| 地址 | 116024遼寧省大連市甘井子區(qū)凌工路2號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 大連理工大學專利中心 |
| 代理人 | 侯明遠;李寶元 |
| 國省代碼 | 遼寧;21 |
| 主權項 | 一種從制備海藻酸鹽微膠囊的廢棄物中回收蛋白的方法，其特征在于，該方法按下列步驟進行： 1)將制備的含海藻酸鹽微膠囊的凝膠液，按照藥物制劑的實際要求，采用篩分法、離心沉降法和旋風分離法中的一種或者一種以上任意組合，分離出液相、符合制劑要求的微膠囊以及未達到制劑要求的微膠囊； 2)對步驟1)所得液體，采用超濾、透析和凝膠層析方法中的一種或者一種以上任意組合對其進行濃縮和脫鹽處理； 3)對步驟1)所得的未達到制劑要求的海藻酸鹽微膠囊，按照微膠囊∶破囊液重量比為1∶20～1∶50的比例，加入濃度為0.05～0.2mol/L的破囊液后，靜置8～24h，其中破囊液為檸檬酸鹽、磷酸鹽、EGTA和乳酸鹽中的一種； 4)對步驟3)所得液體先在1000～10000rpm下離心5～20min，所得上清液在靜置或超聲的條件下進行鹽析沉淀后，再在1000～10000rpm下離心5～20min，其中鹽析所使用的鹽類為30％～100％飽和度的硫酸銨、硫酸鈉(鉀)、氯化鈉(鉀)、硫酸鎂中的一種； 5)離心分離得步驟4)中的沉淀，用生理鹽水、0.05～0.2mol/L的Tris-HCl和0.05～0.2mol/L的PBS中的一種或者一種以上任意組合的緩沖液溶解后，再經過0.45～0.22μm的微孔濾膜過濾； 6)將步驟5)所得的液體上凝膠層析柱，流動相選用與步驟6)中溶解沉淀時相同的緩沖液，以0.1～1mL/min的流速，檢測并收集蛋白的吸收峰，凝膠層析的介質可視回收蛋白的性質不同，選用相應顆粒大小的葡聚糖、瓊脂糖或聚丙烯酰胺中的一種； 7)將步驟6)收集到的液體，采用超濾、透析和凝膠層析方法中的一種或者一種以上任意組合進行濃縮和脫鹽處理。 |
| 摘要 | 一種從制備海藻酸鹽微膠囊的廢棄物中回收蛋白的方法，屬于生物分離工程領域，涉及到蛋白分離、純化技術。本發(fā)明的技術特征是將含蛋白的凝膠化溶液與不符合制劑要求的微膠囊分離開來，對含蛋白的凝膠液進行濃縮、脫鹽；而不符合制劑要求的微膠囊中加入破囊液后，分別在靜置或超聲的條件下，通過鹽析沉淀的方法，從制備海藻酸鹽微膠囊的廢棄物中分離出蛋白，并采用凝膠層析的方法進一步純化和濃縮目的蛋白。本發(fā)明的效果和益處是采用重復性好、不破壞蛋白類藥物的生物活性、易于操作和工業(yè)放大的方法直接從載蛋白類藥物海藻酸鈣微膠囊中分離、回收蛋白，提高了蛋白類藥物的利用率，大大降低了蛋白類藥物傳遞系統(tǒng)的生產成本。 |
| 國際公布 |
