| 公開(公告)號 | CN1473839A |
| 公開(公告)日 | 2004.02.11 |
| 申請(專利)號 | CN03130540.7 |
| 申請日期 | 2003.08.08 |
| 專利名稱 | 馬鈴薯病毒RNA的提取方法 |
| 主分類號 | C07H21/02 |
| 分類號 | C07H21/02;C07H1/08 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 南開大學;天津科潤農(nóng)業(yè)科技股份有限公司蔬菜研究所;;所 |
| 發(fā)明(設計)人 | 杜榮騫;李德森;羅智敏;俞鍵 |
| 地址 | 300071天津市衛(wèi)津路94號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 天津市學苑有限責任專利代理事務所 |
| 代理人 | 趙尊生 |
| 國省代碼 | 天津;12 |
| 主權項 | 一種馬鈴薯病毒RNA的提取方法，其特征在于它包括以下步驟：1)將馬鈴薯莖或葉片組織放入冰預冷的滅菌勻漿器或研缽中，研磨成勻漿；2)向勻漿中加入提取緩沖液Tris-HCl pH8.0 100mmol/L、NaCl 100mmol/L、EDTA10mmol/L和β-巰基乙醇，在離心管中振蕩混勻；3)加入水飽和酚，氯仿/異戊醇(體積比，49∶1)，充分混勻，冰浴中放置10分鐘，其間混勻2～3次；4)以10000轉/分，室溫離心15分鐘，吸取水相，水相中加入0.1倍體積的NaAc，3mol/L，pH5.2，和等體積的異丙醇，混勻，在-20℃中沉淀3小時；5)以11000轉/分，室溫離心20分鐘后，棄去上清，加冰預冷70％的乙醇洗滌沉淀2次，室溫風干，至乙醇揮發(fā)完全為止；6)用無菌雙蒸水充分溶解提取的RNA，測OD值，計算RNA濃度。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種馬鈴薯病毒RNA的提取方法。它包括將馬鈴薯莖或葉片組織放入冰預冷的滅菌勻漿器或研缽中研磨成勻漿，加入提取緩沖液(Tris-HCl pH8.0 100mmol/L，NaCl 100mmol/L，EDTA 10mmol/L)和β-巰基乙醇，混勻，加入水飽和酚，氯仿/異戊醇，室溫離心，水相中加入NaAc(3mol/L，pH5.2)和等體積的異丙醇，-20℃中沉淀3小時；70％的乙醇洗滌沉淀，用無菌雙蒸水充分溶解等步驟。本發(fā)明省去了對器皿的高溫烘烤或DEPC處理，實驗用蒸餾水亦不需DEPC處理。材料的粉碎只需在冰預冷的器皿中進行。全部提取過程均可在常溫下進行。所得到的RNA經(jīng)RT-PCR檢測及序列分析，序列完整，沒有降解。該技術可用于生產(chǎn)上大規(guī)模的馬鈴薯病毒RT-PCR檢測。 |
| 國際公布 |
