公開(公告)號
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CN1487086A
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公開(公告)日
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2004.04.07
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申請(專利)號
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CN03137202.3
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申請日期
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2003.05.26
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專利名稱
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表達(dá)人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的酵母重組株及rhGM-CSF的純化方法
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主分類號
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C12N15/63
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分類號
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C12N15/63;C12N15/81;C12N1/19;C12N15/12;C12N15/27;C12P21/02;C07K14/535;C07K1/36;//(C12N1/19,C12R1∶84)
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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海南國棟藥物研究所
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發(fā)明(設(shè)計)人
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梁國棟;周鵬;夏中寧;蒲廣西
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地址
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571101海南省?诔俏魅世锲氯A南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué)?谛^(qū)教學(xué)綜合樓7層
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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代理人
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國省代碼
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海南;66
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主權(quán)項
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一種表達(dá)重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的分泌型表達(dá)載體,其特征在于,該載體含有:重組的rhGM-CSF序列,其被插入pGAPZα-A之GAP啟動子/α-factor信號肽下游位點,刪除Kex2(Lys-Arg)位點之后的Ste13位點(Glu-Ala-Glu-Ala)和啟始密碼子ATG,構(gòu)建成rhGM-CSF分泌型表達(dá)載體。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的分泌型表達(dá)載體和一種簡易純化方法,用該分泌型表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞,以及用上述表達(dá)載體的畢赤氏酵母重組工程菌株發(fā)酵表達(dá)rhGM-CSF的方法。本發(fā)明采用酵母分泌表達(dá)系統(tǒng)取代大腸桿菌包涵體表達(dá)系統(tǒng),目標(biāo)蛋白rhGM-CSF不需要復(fù)性,其生物比活性可達(dá)到3.4×107單位/毫克蛋白,低毒副作用;因此,本發(fā)明的方法制得的rhGM-CSF不僅產(chǎn)率高,而且純化工藝簡便、成本低、產(chǎn)品毒副作用低。
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國際公布
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