| 公開(公告)號 | CN1513979A |
| 公開(公告)日 | 2004.07.21 |
| 申請(專利)號 | CN03136581.7 |
| 申請日期 | 2003.05.20 |
| 專利名稱 | 重組人骨形成蛋白4和7在甲醇酵母中的高效表達(dá) |
| 主分類號 | C12N1/19 |
| 分類號 | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/12;C12P21/02;C07K14/435;//(C12N1/19,C12R1∶84) |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 福建師范大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 張彥定;陳一平;黃義德 |
| 地址 | 350007福建省福州市福州倉山上三路8號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 福建;35 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種高效表達(dá)重組人骨形成蛋白的基因工程甲醇酵母菌株，其特征在于在甲醇酵母Pichia pastoris的基因組DNA中整合了人骨形成蛋白成熟肽序列，并能在胞外高效表達(dá)重組人骨形成蛋白。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及應(yīng)用甲醇酵母高效表達(dá)人骨形成蛋白技術(shù)，尤其涉及根據(jù)酵母偏愛密碼子對人骨形成蛋白成熟肽序列進(jìn)行定點(diǎn)突變技術(shù)。其特征是用含人BMP4和7cDNA序列的質(zhì)粒pBluescript KS-BMP4和pBluescript KS-BMP7為模板，PCR擴(kuò)增得到人BMP4和7成熟肽cDNA序列。利用簡化的重疊PCR技術(shù)分別對人BMP4和7成熟肽cDNA序列中精氨酸密碼子進(jìn)行定點(diǎn)突變。突變后的序列作為模板克隆到甲醇酵母表達(dá)質(zhì)粒pPIC9K中并轉(zhuǎn)化到甲醇酵母GS115內(nèi)。通過篩選并獲得陽性克隆。構(gòu)建好的工程菌在BMGY和BMMY培養(yǎng)基中培養(yǎng)，經(jīng)甲醇誘導(dǎo)后，高效表達(dá)重組人骨形成蛋白。本發(fā)明方法可高效表達(dá)分泌型重組人BMPs。通過定點(diǎn)突變，表達(dá)量提高了至少5倍，達(dá)到0.2mg/ml以上。重組人BMPs可用于骨科及相關(guān)臨床治療。 |
| 國際公布 |
