| 公開(公告)號 | CN1160464C |
| 公開(公告)日 | 2004.08.04 |
| 申請(專利)號 | CN02110359.3 |
| 申請日期 | 2002.04.27 |
| 專利名稱 | 基因重組制備人肌紅蛋白的方法 |
| 主分類號 | C12N15/63 |
| 分類號 | C12N15/63;C12N15/70;C12N15/12;C12N1/21;C12Q1/68;C07K14/805 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 王桂琴;陳明;史沁衛(wèi) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王桂琴;陳明;史沁衛(wèi) |
| 地址 | 030002 山西省太原市新建路56號山西科技報(bào)宿舍1-201號 |
| 頒證日 | 2004.08.04 |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 山西太原科衛(wèi)專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 朱源 |
| 國省代碼 | 山西;14 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種基因重組制備人肌紅蛋白的方法，包括從組織抽提總RNA、總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA、加入上下游引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增步驟的RT-PCR技術(shù)制備人肌紅蛋白基因的過程、包括將所制備的人肌紅蛋白基因片段、載體質(zhì)粒雙酶切、酶切產(chǎn)物純化連接步驟的重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建過程、重組表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入宿主大腸桿菌、純化的目的基因在轉(zhuǎn)化體表達(dá)的過程和表達(dá)產(chǎn)物純化鑒定的過程，其特征為：其基因制備過程中的擴(kuò)增參數(shù)為：變性：93-95℃1-3min，退火：60-68℃30-60s，延伸：68-72℃30-60s，該過程進(jìn)行35次循環(huán)；重組表達(dá)質(zhì)粒所用的質(zhì)粒為pET-21a(+)；所用的宿主大腸桿菌選用BL21DE3菌株。 |
| 摘要 | 本發(fā)明為基因重組制備人肌紅蛋白的方法，包括RT-PCR技術(shù)制備人肌紅蛋白基因的過程、重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建過程、重組表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入宿主大腸桿菌、純化的目的基因在轉(zhuǎn)化體表達(dá)的過程和表達(dá)產(chǎn)物純化鑒定的過程，重組表達(dá)質(zhì)粒所用的質(zhì)粒為pET-21a(+)，所用的大腸桿菌選用BL21DE3菌株。該方法在插入基因片段兩端設(shè)計(jì)了雙酶切位點(diǎn)的人工接頭，保證了正確的插入方向，使重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建可一次完成，操作更快速、方便、簡單，相對現(xiàn)有技術(shù)大大縮短了制備生產(chǎn)的時(shí)間；表達(dá)產(chǎn)物正確、特異、穩(wěn)定、高效，純化的人肌紅蛋白能與抗人肌紅蛋白單抗特異反應(yīng)，證明純化產(chǎn)物保持了其天然活性，因而，本發(fā)明為制備人肌紅蛋白及其單抗奠定了基礎(chǔ)。 |
| 國際公布 |
