| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1224704C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2005.10.26 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN03150527.9 |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.08.20 |
| 專利名稱 | 重組chBJSTWO蛋白的制備方法 |
| 主分類號(hào) | C12N15/09 |
| 分類號(hào) | C12N15/09;C12N15/12;C12N15/63;C12P21/00;A61K39/39;A61P37/04;A61P31/12;A61P31/04;A61P33/00 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 浙江大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 周繼勇;陳吉?jiǎng)?王金勇;吳建祥 |
| 地址 | 310027浙江省杭州市西湖區(qū)浙大路38號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 張法高 |
| 國(guó)省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種重組chBJSTWO蛋白的制備方法，其特征在于它的步驟如下：1)自中國(guó)的仙居雞、絲羽烏骨雞和外來(lái)品種艾維茵肉雞的脾淋巴細(xì)胞中克隆出chBJSTWO的cDNA與含有PBAD啟動(dòng)子的原核表達(dá)載體pBAD/HisB組建成表達(dá)載體pBAD/HisB/chBJSTWO；或者上述chBJSTWOcDNA與含有PAUG1啟動(dòng)子的真核表達(dá)載體pMETαA組建成分泌型表達(dá)載體pMETαA/chBJSTWO；或者上述chBJSTWOcDNA與含有PAUG1啟動(dòng)子的真核表達(dá)載體pMETA組建成胞內(nèi)表達(dá)型表達(dá)載體pMETA/chBJSTWO，將重組表達(dá)載體pBAD/HisB/chBJSTWO轉(zhuǎn)化入LMG194宿主菌，將重組表達(dá)載體pMETαA/chBJSTWO轉(zhuǎn)化入PMAD11酵母工程菌，將重組表達(dá)載體pMETA/chBJSTWO轉(zhuǎn)化入PMAD16酵母工程菌；2)用RM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過(guò)發(fā)酵擴(kuò)增大腸桿菌工程菌LMG194；3)用BMDY作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過(guò)發(fā)酵擴(kuò)增酵母工程菌PMAD11和PMAD16，在表達(dá)不同時(shí)間加氮源、碳源等營(yíng)養(yǎng)素；4)大腸桿菌LMG194和酵母菌PMAD16誘導(dǎo)后經(jīng)超聲波裂解、離心去沉淀即可得到chBJSTWO粗制品，PMAD11表達(dá)的chBJSTWO主要以分泌形式存在于培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)離心取上清即可得到chBJSTWO粗制品；用Ni-NTAArgarose蛋白純化系統(tǒng)可得到chBJSTWO純品；5)粗制品或純品加入甘氨酸等穩(wěn)定劑和助溶劑后，無(wú)菌過(guò)濾、分裝和凍干后制成成品，保存于-20℃的冷藏環(huán)境中。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一種重組chBJSTWO蛋白的制備方法。RT-PCR擴(kuò)增的不同品系雞BJSTWO的cDNA片段與原核表達(dá)載體pBAD/His B、真核表達(dá)載體pMETαA和真核表達(dá)載體pMETA構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pBAD/His B/chBJSTWO、pMETαA/chBJSTWO和pMETA/chBJSTWO，分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌LMG194、酵母菌株P(guān)MAD11和PMAD16后誘導(dǎo)表達(dá)。大腸桿菌和酵母菌PMAD16誘導(dǎo)后經(jīng)超聲波裂解、離心去沉淀即可得到chBJSTWO粗制品，PMAD11表達(dá)的chBJSTWO主要以分泌形式存在于培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)離心取上清即可得到chBJSTWO粗制品。用Ni-NTA Argarose蛋白純化系統(tǒng)可以較快的得到chBJSTWO純品，粗制品或純品可以作為免疫佐劑、抗病添加劑和疾病治療藥物。本發(fā)明具有工藝流程簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，穩(wěn)定性好，生物學(xué)活性高等特點(diǎn)。 |
| 國(guó)際公布 |
