| 公開(公告)號(hào) | CN1282741C |
| 公開(公告)日 | 2006.11.01 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN96113219.1 |
| 申請(qǐng)日期 | 1996.08.25 |
| 專利名稱 | 核酸擴(kuò)增方法 |
| 主分類號(hào) | C12N9/00(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N9/00(2006.01)I;C12R1/01(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/25(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1995.8.25 US 002673 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 霍夫曼-拉羅奇有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 戴維·E·伯奇;沃爾特·J·萊爾德;邁克爾·A·佐科利 |
| 地址 | 瑞士巴塞爾 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京市柳沈律師事務(wù)所 |
| 代理人 | 巫肖南 |
| 國(guó)省代碼 | 瑞士;CH |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種可逆失活的通過化學(xué)修飾的熱穩(wěn)定性酶，它由具有DNA聚合酶活性或連接酶活性的熱穩(wěn)定性酶與能使所述酶活性可逆失活的修飾試劑所形成的混合物反應(yīng)而產(chǎn)生，其中所述反應(yīng)是在堿性pH中在低于約25℃的溫度中進(jìn)行，所述試劑是具有下列通式的二羧酸酐其中R1和R2是氫或有機(jī)基，它們可以相連，或者所述試劑是具有下列通式的二羧酸酐其中R1和R2是有機(jī)基，它們可以相連，且氫是順式，所述反應(yīng)導(dǎo)致酶活性基本上完全失活。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供了由化學(xué)修飾而可逆失活的熱穩(wěn)定性酶，其特征在于，該化學(xué)修飾的熱穩(wěn)定性酶在溫度低于約25℃時(shí)呈堿性pH的緩中水液中溫育，導(dǎo)致酶活性在少于約20分鐘內(nèi)酶活性無明顯增加，且其中所說的化學(xué)修飾的酶在配成25℃下約pH 8-9的緩沖水液中在大于約50℃的溫度下溫育，導(dǎo)致酶活性在少于約20分鐘內(nèi)酶活性至少增加兩倍。該化學(xué)修飾的熱穩(wěn)定性酶可以用于擴(kuò)增核酸，該失活酶的活性通過在擴(kuò)增反應(yīng)前或作為擴(kuò)增反應(yīng)的部分在增高的溫度下溫育反應(yīng)混合物而恢復(fù)。 |
| 國(guó)際公布 |
