公開(公告)號
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CN1286981C
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公開(公告)日
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2006.11.29
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申請(專利)號
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CN200410061237.7
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申請日期
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2004.11.30
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專利名稱
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表達人類CYP2J2反義基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法
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主分類號
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C12N15/861(2006.01)I
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分類號
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C12N15/861(2006.01)I;C12N15/53(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;C12N7/01(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院
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發(fā)明(設(shè)計)人
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汪道文;蔣建剛;肖 嘯
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地址
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430030湖北省武漢市解放大道1095號轉(zhuǎn)同濟醫(yī)院內(nèi)科汪道文
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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武漢開元專利代理有限責(zé)任公司
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代理人
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王和平
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國省代碼
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湖北;42
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主權(quán)項
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一種表達人類CYP2J2反義基因的重組腺相關(guān)病毒,該重組腺相關(guān)病毒包括的三種質(zhì)粒:1)pXX2:為包裝質(zhì)粒,含有編碼腺相關(guān)病毒Rep蛋白和Cap蛋白的編碼序列,并在上游和下游各插入一個p5啟動子,提供rAAV復(fù)制所必須的Rep蛋白;2)pXXUF1:真核表達載體,含CMV啟動子,有較強的表達效率,其含有一多克隆NotI位點,可以連接不同的目的基因,pXXUF1反向連接人CYP表氧化酶基因,該載體含有rAAV轉(zhuǎn)基因表達所必須的末端重復(fù)序列(ITRs);3)pXX6:為輔助質(zhì)粒,刪除了腺病毒的致病基因序列,保留了腺病毒E1A、E2A和VA1RNA基因;
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摘要
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一種表達人類CYP2J2反義基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法,本發(fā)明所提供的該重組腺相關(guān)病毒,是從人類CYP2J2cDNA長1509bp,編碼含503個氨基酸的蛋白質(zhì),利用PCR法從人類白細胞DNA中克隆人類CYP2J2cDNA,通過三種質(zhì)粒磷酸鈣共轉(zhuǎn)染法包裝制備含反義目的基因的重組腺相關(guān)病毒并純化,制備的重組腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)染不同種類的人腫瘤細胞系,它能明顯抑制各種腫瘤細胞的增殖和遷移、促進腫瘤細胞的凋亡,抑制在體腫瘤瘤體的生長和轉(zhuǎn)移。因此,確定,CYP2J2的選擇性抑制劑和表達反義CYP2J2基因的重組腺相關(guān)病毒是腫瘤治療的潛在藥物。
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國際公布
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