| 公開(公告)號 | CN100334219C |
| 公開(公告)日 | 2007.08.29 |
| 申請(專利)號 | CN200510018686.8 |
| 申請日期 | 2005.05.12 |
| 專利名稱 | 共聚物促進超聲介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的方法 |
| 主分類號 | C12N15/87(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/87(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 陳云超;張青萍 |
| 地址 | 430030湖北省武漢市漢口解放大道1095號(同濟醫(yī)院科研處) |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 武漢開元專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 胡鎮(zhèn)西 |
| 國省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項 | 一種共聚物促進超聲介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的方法，包括以下步驟：1)將共聚物溶解在生理鹽水中，配制成共聚物溶液，過濾除菌后備用，所選擇的共聚物為F127、L61、或P85中的一種；2)將細胞懸液接種在培養(yǎng)皿中隔夜培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液吸干，用磷酸緩沖液清洗，再吸干殘液；3)準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染液：在試管中加入DNA、步驟1)所配制的共聚物溶液、和與步驟2)中細胞懸液對應(yīng)的細胞培養(yǎng)液，使試管中DNA的最終濃度為8μg/ml，共聚物的最終濃度按mg/ml計量為0.001％～0.1％；4)將步驟3)所準(zhǔn)備的轉(zhuǎn)染液加入到步驟2)的培養(yǎng)皿中，轉(zhuǎn)染液的加入量與細胞懸液的接種量相同，置溫箱中培養(yǎng)10～30分鐘；5)將治療用超聲儀探頭面朝上安置在水槽中，水平面覆蓋探頭，然后將步驟4)所得待照射培養(yǎng)皿的底部浸在水中緊鄰探頭，并使待照射孔在探頭的正上面，在照射過程中勻速移動培養(yǎng)皿使培養(yǎng)孔內(nèi)的細胞受到均勻照射；6)將經(jīng)過步驟5)照射的培養(yǎng)皿置溫箱中隔夜培養(yǎng)，次日先用熒光顯微鏡觀察基因轉(zhuǎn)染情況，然后用胰蛋白酶懸浮細胞，流式細胞儀檢測細胞轉(zhuǎn)染率后，用胎盤藍染色檢測細胞成活率。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種共聚物促進超聲介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的方法，主要解決現(xiàn)有非病毒載體基因轉(zhuǎn)染率較低的問題。該方法是將共聚物和超聲結(jié)合起來，應(yīng)用不同的濃度，來檢測各類共聚物對不同細胞系在超聲介導(dǎo)中的基因轉(zhuǎn)染作用，并通過流式細胞儀、熒光顯微鏡和細胞計數(shù)器進行細胞轉(zhuǎn)染率和成活率的檢測，從而獲得不同共聚物在不同濃度時對超聲介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的作用。從附圖中人們可清晰地看到，在一定濃度范圍內(nèi)，這類共聚物和超聲一起可作為一種有效的非病毒基因轉(zhuǎn)染載體提高基因轉(zhuǎn)染，這對疾病的基因治療研究工作具有重要的指導(dǎo)意義。 |
| 國際公布 |
