| 公開(公告)號 | CN1255424C |
| 公開(公告)日 | 2006.05.10 |
| 申請(專利)號 | CN200310109446.X |
| 申請日期 | 2003.12.16 |
| 專利名稱 | 注射用人胎盤核糖核酸的制備方法 |
| 主分類號 | C07H21/02(2006.01)I |
| 分類號 | C07H21/02(2006.01)I;C07H1/08(2006.01)I;A61K31/7088(2006.01)I;A61K35/50(2006.01)I;A61P37/04(2006.01)I;A61P1/16(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 杭州華錦藥業(yè)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 倪明敏;盧 東;周正兵 |
| 地址 | 310013浙江省杭州西湖區(qū)塘苗路18號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 杭州天欣專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 余木蘭 |
| 國省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種注射用人胎盤核糖核酸的制備方法，其特征是：所述的制備方法包括從人體胎盤提取核糖核酸的方法和配制注射用人胎盤核糖核酸的方法，從人體胎盤提取核糖核酸的方法包含以下步驟： A、配制試劑步驟： a、配置0.1mol/l醋酸鹽緩沖液，在0.1mol/l醋酸鹽溶液中包含重量比0.4％～0.6％的十二烷基硫酸鈉、0.1％～0.3％的聚乙烯硫酸酯、0.1％～0.3％的乙二胺四乙酸二鈉，用醋酸調(diào)節(jié)其PH值，達(dá)到PH5.0； b、配置酚飽和緩沖液，將0.1％的分析純8-羥基喹啉苯酚與“a”操作中配置的0.1mol/l醋酸鹽緩沖液等體積混合在分液漏斗中，振搖200～400次，避光靜置8～14小時(shí)，取其上層液體； c、配置緩沖液飽和酚，取“b”操作中的下層液體； d、配置0.3mol/l醋酸鹽緩沖液，在0.3mol/l醋酸鹽溶液中包含重量比6％～8％的醋酸鉀，用醋酸調(diào)節(jié)其PH值，達(dá)到PH5.0； e、配置0.1mol/l醋酸鹽洗液，在0.1mol/l醋酸鹽溶液中包含重量比2％～4％醋酸鉀、0.1％～0.3％聚乙烯硫酸酯、75％乙醇，用醋酸調(diào)節(jié)其PH值，達(dá)到PH5.0； f、配置生理鹽水，用雙蒸水配置含0.9％NaCl生理鹽水； B、破碎粗提步驟： a、取新鮮或冰凍人體胎盤，用去離子水洗凈，去除羊膜、臍帶、大血管； b、將清洗后的胎盤組織剪碎，加4～6倍重量的酚飽和緩沖液和4～6倍重量的緩沖液飽和酚后，破碎得胎盤組織勻漿液； c、進(jìn)行熱酚處理，將勻漿液置于50～80℃水浴中攪拌10～20分鐘后，迅速移入-20～-10℃鹽水浴中速冷至0～10℃； C、精提分離步驟： a、將經(jīng)熱酚處理后的勻漿液進(jìn)行離心分離，吸取上清液放入冰箱0～10℃保存，并收集離心分離出來的酚和蛋白層； b、加入酚和蛋白層重量的1/2～2/3倍量的酚飽和緩沖液，攪拌10～15分鐘后，進(jìn)行離心分離，吸取上清液與前“a”操作的清液合并存放，并收集分離出來的酚和蛋白層； c、加入合并清液重量的1/2～2/3倍量的緩沖液飽和酚，攪拌10～15分鐘后，進(jìn)行離心分離，吸取上清液，重復(fù)此操作，直至上清液和酚層之間無蛋白或極小量蛋白，收集上清液； d、取收集的上清液，按上清液重量的5％～8％的量加入醋酸鉀，待醋酸鉀溶解后加其重量的2～3倍量的-10～-20℃無水乙醇，靜置于-20℃環(huán)境下8～14小時(shí)； e、進(jìn)行離心分離，棄去上清液，收集沉淀即核糖核酸RNA粗制品； D、純化步驟： a、將RNA粗制品按每100克加50～80ml的0.3mol/l醋酸鹽緩沖液，使其溶解，進(jìn)行離心分離，棄去沉淀物，收集上清RNA溶液，加上清RNA溶液重量的2～3倍量的-10～-20℃無水乙醇，置于-20℃環(huán)境中1～2小時(shí)； b、進(jìn)行離心分離，棄去上清液，收集沉淀物，先加入等重量的0.1mol/l醋酸鹽洗液攪成糊狀后，再加入沉淀物重量的6～8倍量的0.1mol/l醋酸鹽洗液攪勻； c、再次進(jìn)行離心分離，棄去上清液，收集沉淀物，先加入等重量的0.1mol/l醋酸鹽洗液攪成糊狀后，再加入沉淀物重量的6～8倍量的0.1mol/l醋酸鹽洗液攪勻，進(jìn)行離心分離，棄去上清液，得RNA純品后加等重量的0.1mol/l醋酸鹽洗液保存在-20℃環(huán)境中； d、將保存的RNA進(jìn)行離心分離，棄上清液，收集沉淀物即RNA純品，吹干后，保存-20℃環(huán)境中。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種注射用人胎盤核糖核酸的制備方法。該制備方法包括從人體胎盤提取核糖核酸的方法和配制注射用人胎盤核糖核酸的方法，從人體胎盤提取核糖核酸的方法包含以下步驟：配制試劑步驟；破碎粗提步驟；精提分離步驟和純化步驟。本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，具有制備的核糖核酸RNA活性高、純度高、毒性小、更容易被人體吸收；制備方法操作簡便，不需消耗大量的有機(jī)溶劑，制備周期短等優(yōu)點(diǎn)。 |
| 國際公布 |
