導(dǎo)赤丸－鹽酸小檗堿的測(cè)定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測(cè)定導(dǎo)赤丸中鹽酸小檗堿的含量。

本方法適用于導(dǎo)赤丸中鹽酸小檗堿含量的測(cè)定。

供試品于量瓶中，加水放置使溶散，加入鹽酸－甲醇液，置水浴加熱，取出，超聲處理，放冷，加鹽酸－甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液加在中性氧化鋁柱上，以乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)�用甲醇溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開(kāi)，用薄層掃描儀進(jìn)行熒光掃描，于激發(fā)波長(zhǎng)λ=366 nm測(cè)量鹽酸小檗堿（C₂₀H₁₇NO₄·HCl)熒光強(qiáng)度的積分值，計(jì)算其含量。，

1. 鹽酸

2 .甲醇

3 .乙醇

4 .苯

5 .醋酸乙酯

6 .異丙醇

7 .氨水

1 儀器

1.1超聲提取器

1.2水浴鍋

1.3薄層掃描儀

1.4涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.5點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.6展開(kāi)室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

2.3中性氧化鋁柱（10～200目， 3g，內(nèi)徑0.9cm)

1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每 1mL含 0.025mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品，剪碎，混勻，精密稱取約 1g，置 100mL量瓶中，加水 5mL，放置使溶散，加入鹽酸－甲醇（1：100)約80mL，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，超聲處理（功率250W、頻率33kH_Z) 15分鐘，放冷，加鹽酸－甲醇（1：100)稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL，加在中性氧化鋁柱（100～200目，3g，內(nèi)徑0.9cm)上，以乙醇25mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)�用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至 5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1. 薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，用商品預(yù)制板。

2. 點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液 4μL、對(duì)照品溶液 2μL與 4μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3. 展開(kāi)

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中，以苯－醋酸乙酯－甲醇－異丙醇－水（20：10：5：5：1)為展開(kāi)劑，置氨蒸氣飽和的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干。

4. 含量測(cè)定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進(jìn)行熒光掃描，激發(fā)波長(zhǎng)：λ=366 nm， 測(cè)量供試品熒光強(qiáng)度的積分值與對(duì)照品熒光強(qiáng)度的積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過(guò)原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過(guò)原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編、化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部p.454。