方法名稱(chēng)： |
葛根芩連微丸－葛根素的測(cè)定－薄層掃描法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用薄層掃描法測(cè)定葛根芩連微丸中葛根素的含量。 本方法適用于中成藥葛根芩連微丸。 |
方法原理： |
供試品加無(wú)水乙醇超聲提取，過(guò)濾，濾液過(guò)中性氧化鋁柱，濾液蒸干，加入無(wú)水乙醇溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開(kāi)，置紫外燈下觀(guān)察，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λS=256nm，λR=360nm測(cè)量葛根素吸收度積分值，計(jì)算其含量。 |
試劑： |
1. 甲醇 2. 氯仿 3. 無(wú)水乙醇 |
儀器設(shè)備： |
1 儀器 1.1 電子天平 1.2 薄層掃描儀 1.3 涂布器 應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。 1.4點(diǎn)樣器 一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。 1.5展開(kāi)室 適合薄層板大小的專(zhuān)用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。 2材料 2.1玻板 要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。 2.2吸附劑 硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。 |
試樣制備： |
1. 供試品的稱(chēng)量 精密稱(chēng)取本品(通過(guò)四號(hào)篩-65目)約0.54g，60℃干燥l h 2. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取葛根素對(duì)照品適量，加乙醇制成lmL含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 3. 供試品溶液的制備 將供試品置具塞三角瓶中，加無(wú)水乙醇25mL，超聲15min，濾過(guò)，無(wú)水乙醇洗滌濾渣和容器2次，每次10mL，合并濾液、洗液，回收乙醇，蒸至約5mL，加于已處理好的中性氧化鋁柱(內(nèi)徑9mm，100-200目，5g，無(wú)水乙醇濕法裝柱)上，先用無(wú)水乙醇20mL洗脫，后改用70％乙醇50mL洗脫，收集70％乙醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)靡掖挤执稳芙�，定量移�?0mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。 |
操作步驟： |
1.薄層板制備 將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。 2.點(diǎn)樣 精密吸取供試品溶液2μL、對(duì)照品溶液2μL與4μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。 3.展開(kāi) 將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中，以氯仿－甲醇－水（60:35:10)10℃以下放置12小時(shí)的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)至8～15cm時(shí)，取出薄層板，晾干，在365nm紫外燈下檢視。 4.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 分別精密吸取1、2、3、4、5μL按以上色譜條件點(diǎn)于薄層板上，展開(kāi)，掃描，以吸收峰面積與對(duì)照品點(diǎn)樣量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得到回歸方程。 5.含量測(cè)定 在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周?chē)媚z布固定，選擇反射方式，采用吸收法，用雙波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λS =256nm，λR=360nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。 |
參考文獻(xiàn)： |
夏宏. 葛根芩連微丸中葛根素的含量測(cè)定. 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2002，22（11)：681-682. |
