糜蛋白酶—糜蛋白酶的測(cè)定—酶效價(jià)測(cè)定法

本方法采用酶效價(jià)測(cè)定法測(cè)定糜蛋白酶的效價(jià)。

本法系測(cè)定糜蛋白酶對(duì)底物降解的速率，以測(cè)定供試品的效價(jià)。

1. N-乙酰－L－酪氨酸乙酯

2. 磷酸鹽緩沖液

3. 0.0012mol/L鹽酸溶液

紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)

1.磷酸鹽緩沖液

取0.067mol/L磷酸二氫鉀溶液38.9mL與0.067mol/L磷酸氫二鈉溶液61.1mL，混合，pH值7.0。

2.底物溶液的制備

取N-乙酰－L－酪氨酸乙酯23.7mg，置100mL量瓶中，加磷酸鹽緩沖液50mL，溫?zé)崾谷芙猓�冷卻后再稀釋至刻度，搖勻。冰凍保存，但不得反復(fù)凍融。

3. 供試品溶液的制備

精密稱取本品適量，用0.0012mol/L鹽酸溶液制成每1mL中含12～16糜蛋白酶的溶液

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

取0.0012mol/L鹽酸溶液0.2mL與底物溶液3.0mL，照紫外－可見(jiàn)分光光度法，在25±0.5°C，于237nm的波長(zhǎng)處測(cè)定并調(diào)節(jié)吸光度為0.200。再取供試品溶液0.2mL與底物溶液3mL，立即計(jì)時(shí)并搖勻，每隔30秒讀取吸光度，共5分鐘（重復(fù)一次)，吸光度的變化率應(yīng)恒定，恒定時(shí)間不少于3分鐘。若變化率不能保持恒定，可用較低濃度另行測(cè)定，每30秒的吸光度變化率應(yīng)控制再0.008～0.012，以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，作圖，取在3分鐘那呈直線的部分，計(jì)算。

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.887。