方法名稱： |
糜蛋白酶—糜蛋白酶的測定—酶效價測定法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用酶效價測定法測定糜蛋白酶的效價。 |
方法原理： |
本法系測定糜蛋白酶對底物降解的速率，以測定供試品的效價。 |
試劑： |
1. N-乙酰－L－酪氨酸乙酯 2. 磷酸鹽緩沖液 3. 0.0012mol/L鹽酸溶液 |
儀器設(shè)備： |
紫外－可見分光光度計 |
試樣制備： |
1.磷酸鹽緩沖液 2.底物溶液的制備 取N-乙酰－L－酪氨酸乙酯23.7mg，置100mL量瓶中，加磷酸鹽緩沖液50mL，溫?zé)崾谷芙�，冷卻后再稀釋至刻度，搖勻。冰凍保存，但不得反復(fù)凍融。 3. 供試品溶液的制備 精密稱取本品適量，用0.0012mol/L鹽酸溶液制成每1mL中含12～16糜蛋白酶的溶液 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
取0.0012mol/L鹽酸溶液0.2mL與底物溶液3.0mL，照紫外－可見分光光度法，在25±0.5°C，于237nm的波長處測定并調(diào)節(jié)吸光度為0.200。再取供試品溶液0.2mL與底物溶液3mL，立即計時并搖勻，每隔30秒讀取吸光度，共5分鐘（重復(fù)一次)，吸光度的變化率應(yīng)恒定，恒定時間不少于3分鐘。若變化率不能保持恒定，可用較低濃度另行測定，每30秒的吸光度變化率應(yīng)控制再0.008～0.012，以吸光度為縱坐標(biāo)，時間為橫坐標(biāo)，作圖，取在3分鐘那呈直線的部分，計算。 |
參考文獻(xiàn)： |
中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.887。 |
